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肠道菌群分子指标在脾虚治疗中药活性组分研究中的应用

作　者: 王卓
导　师: 李晓波
学　校: 上海交通大学
专　业: 药物化学
关键词: 中药复方 脾虚 肠道菌群 活性组分 中药评价及筛选
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 27次
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内容摘要


复方是中药的主要临床应用形式。中药复方活性成分的研究不仅可以阐明复方药理作用的物质基础,还可解释中药复方配伍的科学内涵。脾虚证是中医临床上常见的一类证候,是慢性消化系统疾病的主要证型,与肠道菌群的变化有密切关系。本研究将ERIC-PCR方法用于脾虚治疗中药复方活性组分研究,建立了客观、准确的评价方法并对临床常用三种脾虚治疗中药复方进行筛选,初步确定了三种复方治疗脾虚的活性组分。采用番泻叶、大黄水煎剂塑造脾虚大鼠模型,从大鼠粪便样品中获肠道菌群总DNA,建立脾虚模型大鼠的肠道菌群的ERIC-PCR图谱,通过对比造模前后大鼠粪便肠道菌群的ERIC-PCR指纹图谱,确定脾虚大鼠肠道菌群基因指纹特征以及脾虚治疗的评价指标体系,包括特征条带(净面积与丰度)、多样性指数和相似性指数;运用此评价体系对临床常用复方四君子汤、理中汤、补中益气汤的三个活性组分:乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位的治疗作用进行了考察。本研究首次采用肠道菌群分子指标对中药复方活性组分进行筛选。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章 绪论  11-19
  1.1 脾虚治疗中药复方  11-12
  1.2 脾虚症与肠道菌群变化  12-13
  1.3 肠道菌群的研究方法  13-17
    1.3.1 培养法  14
    1.3.2 镜检法  14
    1.3.3 16SrDNA 基因的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR)方法  14-15
    1.3.4 变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)与温度梯度凝胶电泳(temperature gradient gel electrophoresis,TGGE)  15
    1.3.5 脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)  15-16
    1.3.6 细菌的核酸探针鉴定技术  16
    1.3.7 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）和荧光显微技术  16
    1.3.8 肠道细菌基因间重复序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus , ERIC)研究及应用进展  16-17
  1.4 课题意义与研究内容  17-19
    1.4.1 课题研究的意义和目的  17-18
    1.4.2 课题的研究内容  18-19
第二章 脾虚证肠道菌群分子指标的建立  19-55
  2.1 材料及仪器  19-20
    2.1.1 实验材料  19
    2.1.2 主要试剂  19
    2.1.3 主要实验仪器  19-20
  2.2 实验方法  20-25
    2.2.1 试剂配制  20-21
    2.2.2 脾虚证动物模型的塑造与反证治疗  21
    2.2.3 大鼠粪便样品的收集  21
    2.2.4 大鼠粪便样品中肠道菌群总DNA 的提取  21-23
    2.2.5 总DNA 质量检测  23
    2.2.6 ERIC-PCR 反应条件及产物检测  23-24
    2.2.7 ERIC-PCR 图谱分析  24-25
    2.2.8 数据分析  25
  2.3 结果与讨论  25-55
    2.3.1 脾虚动物模型的塑造  25-27
    2.3.2 菌体基因组总DNA 质量评价  27-28
    2.3.3 健康大鼠粪便肠道菌群的ERIC-PCR 图谱特征  28-31
    2.3.4 番泻叶脾虚大鼠肠道菌群ERIC-PCR 特征条带和脾虚分子评价体系的建立  31-39
    2.3.5 脾虚治疗中药复方对番泻叶脾虚模型大鼠治疗作用的评价  39-50
    2.3.6 小结及讨论  50-55
第三章 脾虚治疗中药复方有效部位的筛选  55-76
  3.1 实验材料与仪器  55
    3.1.1 实验材料  55
    3.1.2 主要试剂  55
    3.1.3 主要实验仪器  55
  3.2 实验内容与方法  55-58
    3.2.1 供试样品及试剂配制  55-56
    3.2.2 复方中不同极性部位的分离  56
    3.2.3 脾虚证动物模型的塑造与治疗  56-57
    3.2.4 大鼠粪便样品的收集  57
    3.2.5 大鼠粪便样品中肠道菌群总DNA 的提取  57
    3.2.6 DNA 检测  57-58
    3.2.7 ERIC-PCR 反应  58
    3.2.8 ERIC-PCR 产物的检测  58
    3.2.9 ERIC-PCR 图谱分析  58
  3.3 结果与讨论  58-76
    3.3.1 脾虚动物模型的塑造  58-60
    3.3.2 复方中药水提物的分离  60
    3.3.3 中药复方各极性部位的肠道菌群指标评价结果  60-73
    3.3.4 小结与讨论  73-76
第四章 结论与展望  76-78
参考文献  78-84
致谢  84-85
个人简历  85
攻读学位期间发表的学术论文  85

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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