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肺炎链球菌溶血素致脑损伤细胞凋亡及凋亡诱导因子的表达及意义

作　者: 王越
导　师: 王怀立
学　校: 郑州大学
专　业: 儿科学
关键词: 肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤细胞凋亡凋亡诱导因子
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 59次
引　用: 1次
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内容摘要

背景和目的肺炎链球菌溶血素(pneumolysin, PLY)是肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae, S.pn)溶解释放的一个主要的毒素,是S.pn的一个主要毒力因子,具有多种功能,能够破坏血脑屏障的紧密连接、引起细胞溶解、刺激炎症因子释放、诱导细胞凋亡等,引起大脑严重损害。海马及大脑皮层神经元的凋亡使患儿学习、记忆能力下降,导致患儿智力低下,严重影响患儿生活质量。近年来PLY致脑损伤机制备受关注,但多局限在体外研究,缺乏直接客观的体内研究。脑损伤后既有细胞坏死又有细胞凋亡。凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor, AIF)是在研究细胞凋亡时发现的,Susin等在1996年发现存在广谱的胱天蛋白酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK时,鼠肝细胞线粒体膜间J隙组分能够使分离的HeLa细胞核染色体以非依赖于caspases的方式发生异常凝集和DNA大片段的形成,遂将其命名为AIF°AIF在感染性脑损伤中扮演者重要角色,但对其具体作用机制及调控机制的了解较少。有研究表明PLY可以通过线粒体释放AIF途径诱导脑细胞凋亡,但却局限在体外研究。本实验通过颈内动脉注射PLY制作感染性脑损伤动物模型,体内研究细胞凋亡及AIF在S.pn所致脑损伤中的作用,为肺炎链球菌脑膜炎的临床治疗拓展新思路。材料与方法将80只幼鼠随机分成溶血素组(PLY组,n=40),左颈内动脉注射0.2mL(7μg)PLY；生理盐水组(NS组,n=40),颈内动脉注射等体积生理盐水。两组按注射后不同时间点分为6h、12h、24h、48h4个亚组,每亚组均10只。于预定时间点处死动物,制备脑组织标本。干湿重法测脑含水量(brain watercontent, BWC),甲酰胺法测定伊文思兰(Evan’s blue, EB)含量,免疫组织化学技术(SP法)测定脑内NSE、GFAP、AIF蛋白表达情况,原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡。所有数据采用SPSS17.0软件进行统计分析,显著性水准为a<0.05。结果1形态学改变：PLY组左侧脑体积较右侧增大,脑组织肿胀发亮,脑膜紧张粘连,脑血管明显充血。HE染色光镜下观察PLY组脑血.管间隙增宽,神经元细胞、胶质细胞不同程度肿胀、空泡变性,NS组没有上述变化。2 PLY组BWC、EB含量、NSE、GFAP(?)水平各时间点均明显高于对照组。差异有统计学意义(p<0.05)。3 PLY组大脑皮层、海马区可见细胞凋亡,随时间逐渐增多,NS组可以见到少许凋亡细胞。PLY注射后6hAIF、凋亡细胞数均明显增加,AIF在24h达高峰,凋亡细胞数在48h仍有较高表达,各时间点与对照组比较均有显著性差异(p<0.05)。4 AIF含量与TUNEL检测细胞凋亡结果呈正相关,r=0.879,p<0.05。结论1 PLY可以通过诱导神经细胞凋亡方式导致脑损伤。2 PLY通过线粒体释放AIF途径诱导神经细胞凋亡。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
中英文缩略词对照表  10-11
引言  11-13
材料和方法  13-21
结果  21-28
讨论  28-37
结论  37-38
附图  38-45
参考文献  45-49
综述细胞凋亡与神经系统疾病  49-68
  参考文献  64-68
个人简历  68-69
致谢  69

肺炎链球菌溶血素致脑损伤细胞凋亡及凋亡诱导因子的表达及意义

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