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ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF和-14bp位点基因变异对转录活性的影响

作　者: 高慎霞
导　师: 毛用敏
学　校: 天津医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: ATP结合盒转运体A1 高密度脂蛋白 基因多态性 转录
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：探讨腺苷三磷酸结合盒转运体Al(ABCAl)基因启动子区域VNTR-ZNF位点和-14bp位点多态性在天津地区人群中的分布频率及其与冠心病(CHD)和血浆高密度脂蛋白(HDL)水平的关系,并通过体外报告基因实验观察2位点变异对转录活性的影响。方法：1.随机抽取天津市胸科医院2007年9月-2009年4月住院的心肌梗死患者166例(CHD组)和同期本单位健康体检者99例(对照组),提取染色体DNA,测定ABCA1基因启动子区域的基因多态性。采用PCR方法扩增含ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点ACCCC插入／缺失多态性基因片段,经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并确定其基因型；PCR方法扩增含-14bp位点C/T单核苷酸变异多态性基因片段,经限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳分离基因多态性片段,以观察2个多态位点变异与CHD和HDL的相关性。2.采用基因重组技术将含VNTR-ZNF位点ACCCC插入型和缺失型DNA片段及同时含VNTR-ZNF位点不同变异与-14bpC或T组合的DNA片段插入携带荧光素酶报告基因的表达载体PGL2,构建重组质粒。将重组质粒转染HepG2细胞进行表达,测定携带不同基因变异DNA片段的质粒荧光素酶活性,观察和分析启动子部位、NTR-ZNF和-14bp位点不同等位基因对转录活性的影响。结果：1.被检总人群ABCAl基因VNTR-ZNF位点等位基因频率分别为ACCCC插入型为0.313,缺失型为0.687;基因型频率分别为ACCCC插入型纯合子6.4%,缺失型纯合子43.8%,插入/缺失型杂合子49.8%。三种基因型频率和等位基因频率在冠心病组和对照组间分布差异无显著性,血浆HDL含量在三种基因型中差异亦无显著性(P>0.05)。2.被检总人群ABCAl基因-14bp位点等位基因频率分别为C等位基因为0.691,T等位基因为0.309；基因型频率分别为CC型44.2%,TT型6.0%,CT型49.8%,三种基因型频率和等位基因频率在冠心病组和对照组间分布差异无显著性,血浆HDL含量在三种基因型中差异亦无显著性(P>0.05)。3.基因重组部分成功构建了PGL2-ZNF-ACCCCDel、PGL2-ZNF-ACCCCIns单位点重组质粒和PGL2-ZNFDel-14C、PGL2-ZNFDel-14T、PGL2-ZNFIns-14C、PGL2-ZNFIns-14T双位点重组质粒,将其转染HepG2细胞培养48h,测定细胞裂解液中报告基因的荧光强度。结果显示单位点的质粒中PGL2-ZNF-ACCCCDel重组质粒荧光素酶活性明显高于PGL2-ZNF-ACCCCIns重组质粒,双位点的质粒中PGL2-ZNFDel-14C重组质粒荧光素酶活性明显高于PGL2-ZNFIns-14C重组质粒,PGL2-ZNFDel-14T重组质粒,PGL2-ZNFIns-14T重组质粒。结论：1. ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点ACCCC插入/缺失变异与血浆HDL水平和冠心病无关,-14bp位点C/T基因变异与血浆HDL水平和冠心病亦无关。天津地区人群ABCA1基因VNTR-ZNF位点基因型分布与欧洲地区人群有明显差异。2.体外报告基因实验显示ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点ACCCC缺失型等位基因的转录活性明显高于插入型等位基因；VNTR-ZNF位点ACCCC缺失与-14bp位点C等位基因同时存在转录活性明显高于单ACCCC缺失型,-14bp位点C等位基因可能加强VNTR-ZNF立点缺失型等位基因的转录活性。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-13
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-13
一、ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点及-14bp位点多态性频率分析及其与冠心病和血浆HDL水平的关系  13-26
  1.1 对象和方法  13-16
    1.1.1 实验对象  13
    1.1.2 主要材料  13
    1.1.3 实验方法  13-16
    1.1.4 统计学分析  16
  1.2 结果  16-21
    1.2.1 ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点的实验结果  16-19
    1.2.2 ABCA1基因启动子区域-14bp位点的实验结果  19-21
  1.3 讨论  21-25
  1.4 小结  25-26
二、ABCAl基因启动子区域VNTR-ZNF和-14bp位点基因多态性在真核细胞中对基因表达调控的影响  26-50
  2.1 材料和方法  26-37
    2.1.1 材料  26-28
    2.1.2 实验方法  28-36
    2.1.3 统计学分析  36-37
  2.2 结果  37-42
    2.2.1 6个重组质粒提取结果  37-40
    2.2.2 重组质粒荧光素酶报告基因的相对活性  40-42
  2.3 讨论  42-50
结论  50-51
参考文献  51-58
发表论文和参加科研情况说明  58-59
综述  59-68
  综述参考文献  65-68
致谢  68

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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