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三聚氰胺在斑点叉尾鮰体内残留及毒性研究

作　者: 邓薇
导　师: 陈孝煊；艾晓辉
学　校: 华中农业大学
专　业: 水产养殖
关键词: 三聚氰胺 斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus) 超高压液相色谱(UPLC) 残留 毒性
分类号: S948
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本文对三聚氰胺在斑点叉尾鮰体内的代谢、残留及毒性进行了研究：1超高压液相色谱(UPLC)检测斑点叉尾鮰血浆及组织中三聚氰胺含量。色谱条件：BeHC18柱(2.1×100 mm,粒度1.7μm),10 mmol/L庚烷磺酸钠+10mmol/L柠檬酸：乙腈=94:6,柱温为30℃,样品温度为18℃,流速为0.3 mL/min,进样量为10μL,紫外检测波长240 nm。实验建立的标准曲线R2达0.9879以上,相关性好,血浆、肌肉、肝脏、肾脏的平均回收率≥76%,比较稳定,其中从血液最高, (99.50±4.69)%；肝脏为(87.00土5.46)%；肾脏(84.10±9.71)%；肌肉中最低为(76.37±4.37)%；变异系数均小于10%,其最低检测限分别为0.05mg/L、0.10、0.05、0.05mg/kg。2研究了三聚氰胺(80 mg/kg)混饲单次口灌在斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)体内的动力学规律。(21±1)℃,给药后,在不同时间采样,用超高压液相色谱法检测,3P97药动学软件处理实验数据。结果表明：斑点叉尾鮰血药—时间数据符合有吸收一室开放模型,动力学方程为C=3.952660(e-0.027279t—e-0.127279t),吸收半衰期(T1/2kα)为5.447 h,消除半衰期(T1/2ke)为25.409 h,达峰时间(TP)为15.405 h,达峰浓度(Cmax)为20.399 mg/L,表观分布容积(Vd)为2.576 (mg/kg)/(mg/L),表明三聚氰胺在血浆中分布广泛,浓度较高,但消除比较缓慢。三聚氰胺在肌肉、肝、肾中动力学参数分别为吸收半衰期(T1,2kα)3.558、4.188、5.440 h,消除半衰期(T1/2ke)为50.808、23.350、23.724 h,达峰时间(TP)为14.677、12.652、14.997 h,达峰浓度(Cmax)为7.645、22.925、40.605 mg/L,表观分布容积(Vd)为8.566、2.397、1.271(mg/kg)/(mg/L),数据表明三聚氰胺在各组织内均有分布,且浓度较高,在三种组织中的吸收呈肾>肝脏>肌肉趋势,整体消除缓慢,但肌肉与其他组织相比消除的快,在各组织中的达峰时间相差不是很大,达峰浓度在肾中最高,肌肉中最低。3研究了三聚氰胺(80 mg/kg)多次混饲口灌在斑点叉尾鮰体内的残留规律。各组织中三聚氰胺含量总体呈现肾脏>肝脏>肌肉；测得的三种组织中三聚氰胺含量在第1d最高,分别为肾脏(39.617 mg/kg)、肝脏(9.920 mg/kg)、肌肉(8.354mg/kg)。停止灌药后第5d肌肉中及第7d肝脏和肾脏组织中三聚氰胺含量低于我国(2008)卫生部公布的乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值和欧盟对中国进口产品设定的三聚氰胺的最大残留限2.5 mg/kg。4研究了不同浓度(80、800、2000mg/kg)和不同时间(5、6、7 d)条件下三聚氰胺对斑点叉尾鮰红细胞的损伤情况。结果显示：三聚氰胺不同浓度组的微核率、核异常率较阴性对照组大多数都有升高,峰值均出现在第6d,微核率为0.88‰,核异常率17.854‰,与阴性对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。结果表明,斑点叉尾鮰以80、800、2000mg/kg浓度口灌三聚氰胺无明显的细胞毒性。5研究了三聚氰胺对斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)血清生化指标的影响。结果显示：实验组甘油三酯(TG)和总胆固醇(T-CHO)含量在整个实验阶段变化不大,与对照组相比,均无显著性差异(P>0.05)。在实验的第8 d,实验组的三种血清酶的活力分别为碱性磷酸酶(ALP)(21.33、35.00、50.67 U/L)、谷草转氨酶(AST)(49.00、66.67、75.67 U/L)、谷丙转氨酶(ALT)(10.67、26.00、35.67 U/L),虽然随着剂量的提高血清酶活力升高,但低浓度组与对照组相比无显著性差异(P>0.05),而800、2000mg/kg浓度组呈显著性差异(P<0.05)；第13、20 d,3种血清酶的含量比第8d均下降,但同一剂量组在不同时间点间变化不大。肌酐(CRE)总体呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05)；同一采样时间点,不同剂量组与对照组比无显著性差异(F>0.05)。在第8 d,800、2000 mg/kg组血清尿素氮(BUN)明显高于对照组,存在显著(P<0.05)和极显著差异(P<0.01),80 mg/kg组与对照组无显著性差异(P>0.05);染毒后第13、20 d,各剂量组BUN含量与对照组均无显著性差异(P>0.05)。

全文目录


摘要  7-9
Abstract  9-12
缩略语表  12-13
第一章 文献综述  13-22
  1 三聚氰胺的名称和化学结构  13-14
  2 三聚氰胺的应用及接触途径  14-15
  3 三聚氰胺的毒理学研究进展  15-17
    3.1 急性毒性  15-16
    3.2 亚慢性及慢性毒性  16
    3.3 遗传毒性  16-17
  4 三聚氰胺的检测方法概况  17-20
    4.1 饲料中三聚氰胺检测法  17-18
    4.2 奶制品中三聚氰胺检测法  18
    4.3 食品中三聚氰胺检测法  18-19
    4.4 其他物质中三聚氰胺检测法  19-20
  5 三聚氰胺的药物动力学和残留研究概况  20
  6 本研究的目的和意义  20-22
第二章 斑点叉尾鮰体内三聚氰胺的超高压液相检测  22-34
  1 材料和方法  22-27
    1.1 实验材料  22-23
      1.1.1 实验鱼  22
      1.1.2 药品、试剂及耗材  22-23
      1.1.3 试验仪器  23
      1.1.4 溶液配制  23
    1.2 实验方法  23-27
      1.2.1 采样  23-24
      1.2.2 样品处理  24-25
        1.2.2.1 血浆处理  24
        1.2.2.2 肌肉样处理  24
        1.2.2.3 肝肾样处理  24-25
      1.2.3 色谱条件  25
      1.2.4 标准曲线和检测限  25-26
        1.2.4.1 标准品标准曲线的制备  25
        1.2.4.2 血浆和各组织标准曲线制备  25-26
      1.2.5 回收率和变异系数  26
      1.2.6 定量方法  26
      1.2.7 定性方法  26-27
  2 结果  27-31
    2.1 三聚氰胺标准品及样品的色谱行为  27-28
    2.2 标准曲线和最低检测限  28-31
      2.2.1 标准曲线线性范围和相关性  28-29
      2.2.2 工作曲线方程和相关系数  29-31
    2.3 回收率及变异系数  31
  3 讨论  31-34
    3.1 提取与回收率  31-32
    3.2 液相色谱条件  32-33
    3.3 检测波长的选择  33-34
第三章 三聚氰胺在斑点叉尾鮰体内的代谢及残留  34-41
  1 材料和方法  34-35
    1.1 实验材料  34
    1.2 给药方法及采样  34-35
      1.2.1 给药方法  34
      1.2.2 采样  34-35
    1.3 实验方法  35
      1.3.1 样品处理  35
      1.3.3 色谱条件  35
      1.3.4 样品测定方法、定量方法及定性方法  35
  2 结果  35-38
    2.1 三聚氰胺在斑点叉尾鮰体内的代谢动力学  35-37
    2.2 三聚氰胺在斑点叉尾鮰体内的残留规律  37-38
  3 讨论  38-41
    3.1 最适模型  38-39
    3.2 吸收  39
    3.3 分布与消除  39-40
    3.4 残留消除  40-41
第四章 三聚氰胺对斑点叉尾鮰血细胞微核及核异常的影响  41-47
  1 材料  41-42
    1.1 试验鱼  41
    1.2 仪器和试剂  41-42
  2 方法  42-43
    2.1 试验浓度的确定  42
    2.2 染毒  42
    2.3 血涂片的制备  42-43
    2.4 微核的观察和统计  43
    2.5 数据处理  43
  3 结果  43-46
  4 讨论  46-47
第五章 三聚氰胺对斑点叉尾鮰血清生化指标的影响  47-53
  1 材料与方法  47-48
    1.1 材料  47
    1.2 实验设计及血清制备  47-48
    1.3 血清生化指标的测定  48
    1.4 数据统计与处理  48
  2 结果  48-50
  3 讨论  50-53
    3.1 三聚氰胺对3种血清酶的影响  50-51
    3.2 三聚氰胺对血脂CHO和TG的影响  51
    3.3 三聚氰胺对血清BUN和CRE的影响  51-53
参考文献  53-59
附录  59-60
致谢  60

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 水产药物学、药理学
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