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Lipstatin的开发与研究

作　者: 王栋海
导　师: 钱秀萍
学　校: 上海师范大学
专　业: 微生物学
关键词: Lipstatin 毒三素链霉菌 抗生素诱变育种 发酵工艺优化 原生质体制备 质粒抽提
分类号: TQ463
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 219次
引　用: 2次
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内容摘要


Lipstain是毒三素链霉菌产生的一种抑制胰脂肪酶活性的次级代谢产物。其四氢衍生物已经开发成为一种新型的减肥药物塞尼可。 本文对lipstatin产生菌毒三素链霉菌进行了菌种选育，对发酵条件及发酵培养基进行了优化，探索了毒三素链霉菌的原生质体制备方法及质粒抽提方法。 利用双氢链霉素作为一种筛选压力，结合紫外线及NTG诱变方法对毒三素链霉菌进行了筛选。结果表明，双氢链霉素的加入有利于筛选得到Lipstatin高产菌株。 对毒三素链霉菌的发酵工艺进行了优化。确定了最佳发酵温度为30℃，最优初始pH为6.0，最佳摇瓶装量为10％，最佳摇床转速为220rpm；通过培养基的单因素试验及正交试验最终确定最佳发酵培养基配方为：豆油5.0％，甘油2.0％，去脂黄豆粉3.0％，卵磷脂1.6％，MgSO4 0.005％，ZnSO4 0.01％。 成功制备了毒三素链霉菌的原生质体。考察了培养基组分、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、酶解温度及酶解时间等因素对原生质体的形成和再生的影响。通过质粒抽提实验证明本实验所用菌株内不含有质粒。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
第一篇 文献综述  7-22
  1 减肥药物的研究现状及进展  7-9
    1.1 食欲抑制剂  7-8
    1.2 产热剂  8-9
    1.3 消化吸收阻滞剂  9
    1.4 激素调节剂  9
  2 微生物来源的脂肪酶抑制剂  9-15
    2.1 微生物来源的酶抑制剂的研究进展  9-10
    2.2 微生物来源的胰脂肪酶抑制剂的种类  10-12
    2.3 胰脂肪酶抑制剂的作用机制  12
    2.4 Lipstatin生物合成的研究  12-15
  3 微生物的诱变育种  15-18
    3.1 出发菌株的选择  16-17
    3.2 出发菌株的纯化  17
    3.3 单孢子(单细胞)悬液的制备  17
    3.4 诱变剂及诱变剂量的选择  17-18
  4 立题依据  18-20
  参考文献  20-22
第二篇 实验部分  22-71
  第一章 毒三素链霉菌的推理选育  22-36
    1 材料与仪器  23-25
      1.1 菌种  23
      1.2 主要试剂  23-24
      1.3 主要仪器  24
      1.4 主要培养基  24-25
    2 实验方法  25-27
      2.1 抗生素溶液的配制  25
      2.2 孢子悬浮液的制备  25
      2.3 四种抗生素对毒三素链霉菌的最小抑制浓度的测定  25
      2.4 链霉素抗性筛选方法  25
      2.5 卡那霉素、核糖霉素及庆大霉素抗性筛选方法  25
      2.6 NTG诱变处理  25-26
      2.7 紫外线(UV)诱变处理  26
      2.8 毒三素链霉菌发酵流程  26-27
      2.9 发酵液的预处理  27
      2.10 Lipstatin的分析检测方法  27
    3 结果与讨论  27-34
      3.1 四种抗生素对毒三素链霉菌的最小抑制浓度  27
      3.2 四种抗生素抗性菌株的获得  27-32
      3.3 复合处理结果  32-34
    4 本章小结  34-35
    参考文献  35-36
  第二章 Lipstatin发酵工艺优化  36-56
    1 材料与仪器  37-39
      1.1 菌种  37
      1.2 主要试剂  37-38
      1.3 主要仪器  38-39
      1.4 主要培养基  39
    2 实验方法  39-42
      2.1 甘油的测定  39
      2.2 种子生长曲线的测定  39
      2.3 摇瓶发酵工艺条件的优化  39-40
      2.4 摇瓶发酵培养基的优化  40-42
    3 结果与讨论  42-53
      3.1 摇瓶发酵工艺条件的优化  42-46
      3.2 摇瓶发酵培养基的优化  46-53
    3 本章小结  53-55
    参考文献  55-56
  第三章 毒三素链霉菌原生质体制备及再生  56-71
    1 材料与方法  56-63
      1.1 菌种  56
      1.2 主要试剂  56-57
      1.3 主要培养基  57-58
      1.4 常用溶液  58-60
      1.5 主要仪器  60
      1.6 原生质体制备方法  60-63
    2 结果与讨论  63-69
      2.1 培养基对原生质体制备及再生的影响  63-64
      2.2 甘氨酸浓度对原生质体制备及再生率的影响  64
      2.3 溶菌酶浓度对原生质体形成和再生的影响  64-65
      2.4 酶解温度考察  65-66
      2.5 酶解时间研究  66-67
      2.6 原生质体再生培养基的选择  67-68
      2.7 质粒抽提  68-69
    3 本章小结  69-70
    参考文献  70-71
全文总结  71-72
致谢  72-74

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 有机化合物药物的生产
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