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银杏树内生真菌代谢产物中活性成分的研究
作 者: 易大为
导 师: 何建勇;白秀峰
学 校: 沈阳药科大学
专 业: 微生物与生化药学
关键词: 内生真菌 筛选 银杏内酯 镰孢菌 环肽
分类号: Q936
类 型: 硕士论文
年 份: 2003年
下 载: 474次
引 用: 13次
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内容摘要
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内生真菌长期生活在植物组织内部,与宿主协同进化,在演化过程中二者形成了互惠共生的关系,在宿主的生长发育和系统演化过程中起重要作用。内生真菌可产生一些重要的治疗人类疾病的药物,对内生真菌次级代谢产物的研究,可以筛选得到一些结构新颖、活性专一的物质。本文以银杏树内生真菌(Endophytic fungus of Ginkgo biloba L., EG)为研究对象,通过对内生真菌胞内产物的研究,定向筛选银杏内酯产生菌。 首先,从原始菌种EG3出发,在筛选过程中分离得到菌株G3-1、G3a、G3b、GAR、GAY、F1-3和F3,其中菌株G3b、GAR、GAY、F1-3和F3经菌种鉴定,被归属为半知菌亚门、丝孢纲、瘤座孢目、瘤座孢科、镰孢菌属(fusarium)。 应用高效液相色谱法和电喷雾质谱法以及液相质谱联用技术,以银杏内酯标准品为对照,对G3系列菌株的胞内产物进行了筛选和检测。由检测结果初步认定,菌株G3b和F3的代谢产物中含有银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯。 在菌株F1-3的发酵液中,检测到有抗革兰阳性菌的物质存在,通过对活性成分的追踪,分离得到化合物F1-3A和F1-3B。经过质谱、1H谱、13C谱以及二维核磁共振波谱的测定和解析,确定化合物F1-3A的分子结构为: cyclo[Hiv-Me-Val-Hiv-Me-Val-Hiv-Me-Val];质谱、1H谱及13C谱的数据与环肽类抗生素Enniatin B的文献值基本一致,认定二者同质。经过质谱测定和解析,化合物F1-3B可能与Enniatin B1或Enniatin D同质。
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全文目录
摘要 7-8 ABSTRACT 8-9 缩语表 9-10 前言 10-24 实验材料与方法 24-30 实验结果 30-58 1 菌种的分离纯化与鉴定 30-34 2 实验出发菌株的筛选 34-42 2.1 菌体代谢物在TLC上层析行为的考察 34-35 2.2 菌体代谢物在HPLC上保留行为的考察 35-37 2.3 HPLC分析基础上的质谱解析 37-40 2.4 应用HPLC/ESI-MS法对菌体代谢物中活性成分的检测 40-42 3 分离提取部分 42-49 3.1 内生真菌胞内产物的浸提 42-44 3.2 菌丝体粗提物的液液萃取 44-49 4 银杏树内生真菌抗菌活性物质的筛选 49-54 5 化合物F1-3A的结构测定和光谱解析 54-56 6 环肽类抗生素Enniatins的研究概况 56-58 结论 58-59 讨论 59-61 参考文献 61-66 附图 66-95 致谢 95
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中图分类: > 生物科学 > 微生物学 > 微生物生物化学
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