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杜氏藻提取物防治肿瘤作用的初步探讨

作　者: 刘丽萍
导　师: 胡人杰
学　校: 天津医科大学
专　业: 药理学
关键词: 杜氏藻细胞毒活性免疫减毒增效抗突变
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的：杜氏藻(Dunaliella salina)由于其胡萝卜素含量高,具有抗衰老、防癌抗癌、降低心血管病发生率、美容护肤以及补充维生素A等功能,因此杜氏藻中所含β-胡萝卜素是目前杜氏藻研究开发的热点,但是杜氏藻中其他类化合物(除多糖外)的生物活性目前国内外尚未见报道。本试验的研究的目的在于探求杜氏藻中除β-胡萝卜素和多糖外是否还含有其他防治肿瘤的活性成分,为杜氏藻得到更充分的开发利用打下基础。方法：①杜氏藻提取物的制备：将杜氏藻糊经蒸馏水洗涤去除盐分,避光条件下干燥并研制成粉。将干燥的杜氏藻粉依次用石油醚→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水回流提取,按极性由小至大得到六个部分的提取物,水提物经乙醇沉淀(水/无水乙醇1：5,V/V)后,得到两种样品；氯仿提取物经硅胶色谱柱分离纯化去除β-胡萝卜素后,得到三种样品,总共得到A、B2、B3、B4、C、D、E、F1、F2九个供实验用的样品。②样品抗肿瘤活性评价：采用MTT法测定样品对肿瘤细胞(小鼠肿瘤U14和S180,人肿瘤细胞A549和Hela)细胞毒活性,评价指标为样品的IC50；③样品免疫活性评价：采用体外ConA诱导的淋巴细胞增殖试验,评价指标为对淋巴细胞增殖的促进(或抑制)率；④样品减毒作用评价：采用肿瘤化疗药物表阿霉素杀伤骨髓细胞的体外试验模型,观察样品对化疗药物杀伤骨髓细胞的保护作用,评价指标为骨髓细胞存活率；⑤样品化疗增效作用的评价：以体外肿瘤细胞增殖抑制试验为基础,观察样品与化疗药物表阿霉素、顺铂合用后对肿瘤细胞抑制率的影响,评价指标为抑瘤率及Q值；⑥防癌作用的评价：采用Ames试验,选择TA98为测试菌株,以化疗药物阿霉素为阳性诱变剂,以阿霉素产生诱变作用并在此基础上观察样品有无抗诱变作用,以MR值为评价指标。结果：①600g杜氏藻糊经洗涤去除盐分得到131.1g杜氏藻干粉。提取物A、B(β-胡萝卜素及B2、B3、B4)、C、D、E及F(F1及F2)的收率分别为5.19%、10.53%、0.92%、0.38%、4.27%、11.67%。经紫外分光光度法和薄层色谱法分析提取物B中含β-胡萝卜素,经柱色谱分离得到β-胡萝卜素146.2mg。②杜氏藻各部分提取物对小鼠U14、S180及人A549、Hela肿瘤细胞珠均有不同程度的细胞毒作用,在一定浓度范围内基本上保持明确的量效关系。其中A、B3显示出较强的细胞毒活性,Fl、F2无细胞毒活性(IC50>1.0mg/mL)。③杜氏藻各部分提取物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞(主要是T淋巴细胞)的增值表现出了明确的抑制作用,其对淋巴细胞增殖的抑制作用基本上呈剂量依赖性。④提取物B4与C均对阿霉素所致小鼠骨髓细胞的损伤具有一定的保护作用,其中C的作用优于B4,提取物C终浓度为2.5、5、10、20、40μg/mL时可对抗阿霉素对骨髓细胞的杀伤作用,使骨髓细胞的生存率由47.46%分别提高到57.62%、55.11%、60.35%、56.71%、57.85%(P均小于0.05)。⑤杜氏藻提取物A及B3与顺铂合用对U14肿瘤细胞的抑制作用具有协同效应(Q>1.15),但两种样品与表阿霉素合用对小鼠U14细胞抑制无明显协同作用(Q=0.93-1.05),而对小鼠S180细胞表现出一定的拮抗作用(Q<0.85)。⑥杜氏藻提取物F1,其测试浓度为0.1、1.0、10.0μg/(?)时,能对抗阿霉素对TA98菌株的诱变作用,其诱变抑制率分别为53.38、94.79、66.07%。其中F1的低、中、高剂量组与阿霉素诱变组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论：杜氏藻中除β-胡萝卜素和多糖外还含有其他抗肿瘤活性成分,具有能对抗化疗药物表阿霉素所致骨髓细胞杀伤的活性成分和提高肿瘤细胞对化疗药物顺铂敏感性的成分,此外杜氏藻中还含有抗突变作用的成分。杜氏藻作为防治肿瘤的药物或食品具有研究开发的价值。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-10
符号说明  10-11
前言  11-14
杜氏藻活性成分的提取流程图  14-15
实验一杜氏藻粉及试验用样品的制备材料与方法  15-20
  材料与方法  15-18
  结果  18-19
  小结  19-20
实验二杜氏藻提取物对肿瘤细胞增殖的影响  20-43
  材料与方法  20-24
  结果  24-42
  小结  42-43
实验三杜氏藻提取物对小鼠脾脏免疫细胞增殖的影响  43-50
  材料与方法  43-45
  结果  45-49
  小结  49-50
实验四杜氏藻提取物对表阿霉素所致小鼠骨髓细胞损伤的保护作用  50-54
  材料与方法  50-52
  结果  52-53
  小结  53-54
实验五杜氏藻提取物对表阿霉素、顺铂肿瘤细胞毒的增效作用  54-62
  材料与方法  54-56
  结果  56-61
  小结  61-62
实验六杜氏藻提取物的抗诱变作用  62-69
  材料与方法  62-66
  结果  66-68
  小结  68-69
讨论  69-79
展望  79-81
结论  81-82
参考文献  82-88
发表论文和参加科研情况说明  88-89
综述  89-100
  综述参考文献  96-100
致谢  100

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