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清热益气通窍法对慢性鼻窦炎兔IL-8、TNF-α影响的实验研究

作　者: 周桦
导　师: 熊大经
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医五官科学
关键词: 清热益气通窍法慢性鼻窦炎 IL-8 TNF-α TNF-αmRNA 实时荧光定量PCR ELISA
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：通过动物实验从对炎症细胞因子影响的角度揭示清热益气通窍法治疗慢性鼻窦炎这一常见难治性疾病的分子生物学机制。方法：取体重1.5-3.0kg健康新西兰大白兔100只,雌雄各半。按Ⅱ级生物安全标准无菌饲养1周后,按入实验室先后顺序编号,采用SAS软件生成的随机数字表进行随机化分配,分为：正常组、模型组、假手术组、中药组、西药组,共5组,每组20只。随后采用林彬等报道的“窦口不完全堵塞+窦腔留置棉絮”的造模方法,建立兔慢性鼻窦炎模型。从造模后第1天开始,对动物的一般情况以及症状体征的变化进行观察；造模后第43天开始,中药组和西药组分别按1.5ml/kg·d及25mg/kg·d灌服相应药物。用药2周后,心脏取血提取血清,处死动物,而后在超净台冰盘上取出鼻黏膜。用ELISA法检测各组新西兰兔血清中IL-8、TNF-α的含量；所取出鼻黏膜先提取mRNA,再将mRNA反转录成相cDNA,用实时荧光定量PCR法测定肿瘤坏死因子-αmRNA(TNF-αmRNA)的表达。并在光镜下观察各组鼻黏膜的病理形态变化。结果：1.模型组兔血清中IL-8、TNF-α含量及兔鼻黏膜中TNF-αmRNA表达量与正常组相比明显升高,有显著性差异(P<0.01)；2.中药和西药组兔血清中IL-8、TNF-α的含量及兔鼻黏膜TNF-αmRNA的表达量均降低,与模型组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01),与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05)；3.假手术组兔血清中IL-8、TNF-α含量及兔鼻黏膜中TNF-αmRNA表达量与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05)；4.光镜下观察显示：中药组各兔鼻黏膜上皮修复较好,炎细胞浸润、腺体和杯状细胞增生不如西药组明显。结论：清热益气通窍法可以有效改善慢性鼻窦炎所引起的全身及局部症状的表现,并能明显改善鼻黏膜病理反应,同时能通过降低兔血清中IL-8、TNF-α的浓度及兔鼻黏膜中TNF-αmRNA的表达以有效抑制炎症的发展及对鼻黏膜的损伤。

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-8
英文缩略词  8-9
1 前言  9-11
2 实验研究  11-23
  2.1 实验材料  11-12
    2.1.1 实验动物  11
    2.1.2 主要实验仪器及设备  11-12
    2.1.3 实验药物及主要试剂  12
  2.2 实验方法  12-18
    2.2.1 实验分组  12
    2.2.2 慢性鼻窦炎模型的建立  12-13
      2.2.2.1 菌种的制备  12-13
      2.2.2.2 造模方法  13
    2.2.3 给药方法  13
    2.2.4 取材  13-14
      2.2.4.1 血清获取  13
      2.2.4.2 鼻黏膜上皮获取  13-14
      2.2.4.3 鼻黏膜HE切片制作  14
    2.2.5 检测指标及方法  14-18
      2.2.5.1 主要症状体征  14
      2.2.5.2 一般情况  14
      2.2.5.3 光学显微镜HE染色法观察鼻黏膜组织的病理形态学改变  14-15
      2.2.5.4 酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-8、TNF-α浓度  15
      2.2.5.5 实时荧光定量PCR检测鼻黏膜组织中TNF-α mRNA的表达  15-18
    2.2.6 统计方法  18
  2.3 实验结果及分析  18-23
    2.3.1 造模及死亡情况  18-19
    2.3.2 主要症状体征观察  19
    2.3.3 一般情况观察  19
    2.3.4 鼻黏膜组织的病理形态学观察  19-20
    2.3.5 血清中IL-8含量的测定  20-21
    2.3.6 血清中TNF-α含量的测定  21-22
    2.3.7 兔鼻黏膜中TNF-α mRNA的测定  22-23
3 讨论  23-37
  3.1 关于造模方法  23-26
  3.2 西医学对慢性鼻窦炎的认识  26-28
  3.3 中医学对鼻渊的认识  28-31
    3.3.1 历代医家对鼻渊的认识  28-29
    3.3.2 中医学治疗鼻渊的思维  29
    3.3.3 鼻渊与脏腑的关系  29-31
      3.3.3.1 与胆的关系  29-30
      3.3.3.2 与肺的关系  30-31
      3.3.3.3 与脾的关系  31
  3.4 清热益气通窍法立法依据及组方分析  31-32
    3.4.1 鼻渊宜从胆治,与肺脾相关  31-32
    3.4.2 组方分析  32
  3.5 清热益气通窍法能改善慢性鼻窦炎兔的整体机能  32-33
  3.6 清热益气通窍法对慢性鼻窦炎兔鼻黏膜病理变化的影响  33-34
  3.7 清热益气通窍法对CRS兔IL-8、TNF-α的影响  34-37
    3.7.1 清热益气通窍法对CRS兔血清中IL-8的影响  34-35
    3.7.2 清热益气通窍法对CRS兔血清中TNF-α的影响  35-36
    3.7.3 清热益气通窍法对CRS兔鼻黏膜中TNF-α mRNA表达的影响  36-37
4 结论  37-38
5 问题与展望  38-39
  5.1 关于动物模型  38
  5.2 观察指标的选择  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-43
综述  43-54
  参考文献  52-54
附图  54-55
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  55-56

清热益气通窍法对慢性鼻窦炎兔IL-8、TNF-α影响的实验研究

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