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HBV在肝癌细胞中新的整合位点MCM3AP及其致癌机制的初步研究

作　者: 王晶
导　师: 杨玉珍
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: HBV整合 Alu-PCR 原发性肝细胞癌 MCM3AP
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)是全世界范围内及其严重的致死性疾病之一,其中大部分为乙肝病毒(HBV DNA)相关性肝细胞癌,且亚洲的病例占绝大多数。中国作为一个乙肝大国,其乙肝相关性肝细胞癌自然占据了很大一部分比例,在患者感染HBV漫长的病程中,研究发现HBV-DNA可以整合入人类基因组中并对其附近的基因发生作用,导致基因组功能的改变及不稳定性,但HBV整合与乙肝病毒相关性肝细胞癌发生的确切机制尚在研究之中。本课题旨在寻找HBV在乙肝病毒相关性肝癌中新的整合位点,并寻求HBV整合的新的致癌机制。方法收集30例乙肝相关性肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织(来自华中科技大学同济医学院肝外科)及5例正常肝组织(华中科技大学同济医学院器官移植研究所)分别提取各自组织基因组的DNA,经分光光度计测定,确定DNA提取的浓度及纯度符合要求。设计各自目的引物,采用Alu-PCR、半巢式PCR及Touchdown PCR结合的方法测定HBV DNA在肝癌组织、癌旁组织及正常对照肝组织中的整合位点。通过凝胶电泳观察后,送至测序。经通过与人基因组BLAST对比分析确定HBV DNA的整合位点及其相邻基因,发现HBV DNA在人基因组中新的整合位点,其中与DNA复制相关的基因为MCM3AP.。分别提取肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织的总RNA,经分光光度计测定,确定RNA提取的浓度及纯度符合要求并设计引物,采用RT-PCR分析MCM3AP基因在同一例肝癌患者中的肝癌组织、癌旁组织的表达水平,及在不同分化程度的不同肝癌组织中的表达水平,均以正常肝组织做对照,经凝胶电泳跑胶观察并行光密度分析,同时初步探索其上调表达对肝癌发生的影响。结果通过Alu-PCR,测序获得19例肝癌组织中HBV的整合位点,其蛋白质编码基因如下:LOC51030, LOC157777, minichromosome maintenance complex component 3 associated protein (MCM3AP), MCTP1, SH3 and multiple ankyrin repeat domains 2 isoform 2, CCDC40, similar to HCG2033532, mitochondrial ribosomal S5 pseudogene 4。其中一例HBV整合于MCM3AP的内含子中,经过RT-PCR检测,在该例患者中MCM3AP基因的表达从高到低依次为肝癌组织、癌旁组织、正常对照肝组织,其MCM3AP mRNA表达水平分别为1.07375、0.21573、0.06747,其差异具有显著性(P<0.05)。在HBV DNA整合入MCM3AP的肝癌组织中,MCM3AP mRNA的表达也明显高于HBV DNA未整合入MCM3AP的肝癌组织。结论HBV DNA在人基因组中的整合是随机性的,MCM3AP是其中一新的整合位点,该实验结果表明HBV DNA整合于人基因组后会影响其附近基因的表达,并参与乙肝相关性肝癌的发生发展过程。

全文目录


英文缩略词表  6-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
材料与方法  13-23
结果  23-27
讨论  27-30
参考文献  30-33
综述  33-41
  参考文献  38-41
附录  41-54
致谢  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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