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α-酮戊二酸盐受体hGPCRc的活化效应及对糖尿病肾病模型细胞的影响

作　者: 黄琳仪
导　师: 刘永学
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药理学
关键词: hGPCRc α-酮戊二酸钠糖尿病肾病肾小管上皮细胞肾小球系膜细胞细胞因子
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

在对hGPCRc的前期研究中，我们从人结肠组织克降到该受体成员并命名为hGPCRc，并对其组织分布、亚细胞定位及可能配基进行了检测。2004年有文献报道hGPCRc的内源性配基为α-酮戊二酸盐，该结果与传统意义上的GPCR配基性质相去甚远，令人备感意外。本研究首先获得稳定表达hGPCRc的工程细胞株，并以此细胞株检测α-酮戊二酸钠活化hGPCRc后胞内游离钙离子浓度的变化，然后建立了体外糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)模型，初步探讨了α-酮戊二酸盐受体与DN之间的可能关系。主要结果如下：一、α-酮戊二酸盐受体被激活后的生化效应成功建立了CHO-hGPCRc工程细胞株，RT-PCR结果表明，所得工程细胞株CHO-hGPCRc能够稳定表达hGPCRc；α-酮戊二酸钠可引起工程细胞株内游离钙离子浓度的变化，表现为钙波动幅度明显增加，并呈浓度依赖性；而且α-酮戊二酸钠引起的胞内钙离子波动，不受细胞外钙离子浓度的影响，是细胞钙库动员的结果。二、α-酮戊二酸盐受体对DN模型肾小管上皮细胞(RTEC)的影响原代培养肾小管上皮细胞，并在25mM高糖条件下建立DN模型。RT-PCR结果表明，与正常RTEC细胞相比较，DN模型细胞内TGF-β、α-SMA、CTGF、MCP-1和ICAM-1等诸多细胞因子的mRNA表达水平明显升高；α-酮戊二酸钠可上调hGPCRc的表达，并对DN模型细胞中上述细胞因子的mRNA表达升高具有抑制作用。三、α-酮戊二酸盐受体对DN模型细胞肾小球系膜细胞(MC)的影响原代培养肾小球系膜细胞，并在25mM高糖条件下建立DN模型。MTT结果表明，α-酮戊二酸钠可抑制高糖诱导的MCs细胞增殖；RT-PCR结果表明，α-酮戊二酸钠可下调高糖诱导下的TGF-β／MCP-1 mRNA表达升高。结论：1、α-酮戊二酸盐受体hGPCRc可被α-酮戊二酸钠激活，并通过细胞内钙库释放增加细胞内游离钙离子浓度。2、首次证实α-酮戊二酸钠可以调节DN模型肾小管上皮细胞多种细胞因子mRNA表达的变化，可以抑制DN模型细胞的肾小管上皮肌成纤维细胞转分化(TEMT)作用和细胞外基质(EMC)的形成。3、α-酮戊二酸钠具有抑制系膜细胞增殖和减少DN模型细胞内TGF-β、MCP-1分泌的作用。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-14
第一部分 α-酮戊二酸盐受体hGPCRc的活化效应  14-26
  材料  14-17
  方法  17-21
  结果  21-24
  讨论  24-26
第二部分 α-酮戊二酸盐受体hGPCRc对DN模型RTEC细胞的影响  26-45
  材料  27-31
  方法  31-35
  结果  35-43
  讨论  43-45
第三部分 α-酮戊二酸盐受体hGPCRc对DN模型MC细胞的影响  45-56
  材料  45-47
  方法  47-49
  结果  49-53
  讨论  53-56
总结  56-57
参考文献  57-62
文献综述  62-68
发表文章情况  68-72
致谢  72

α-酮戊二酸盐受体hGPCRc的活化效应及对糖尿病肾病模型细胞的影响

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