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犬细小病毒新抗原变异株的分离鉴定及单克隆抗体的制备

作　者: 刘大伟
导　师: 孙岩松；杨敬
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 预防兽医学
关键词: 犬细小病毒新抗原变异株序列分析分离鉴定单克隆抗体
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)引起的犬及其他食肉动物的一种具有高度接触性的传染病。犬细小病毒为单链线状DNA病毒，主要结构蛋白为VP1和VP2。VP2基因全长1755bp，编码CPV的主要抗原决定簇可诱导机体产生中和抗体，决定着抗原型及宿主的特异性。本研究从临床疑似病犬的粪便中分离出CPV，用常规方法和分子生物学的方法予以鉴定，并以病毒为抗原，建立了一株抗CPV单克隆细胞株，为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断试剂和治疗奠定了基础。一、犬细小病毒新抗原变异株VP2基因的克隆与序列分析：从疑似病犬粪便中提取DNA，根据基因库CPV-d序列设计引物，PCR扩增出VP2基因并测序，与标准序列进行同源性分析从而鉴定犬细小病毒抗原变异株的抗原型。结果表明：得到VP2序列16份，5份为CPV-2b型，1份为FPV，10份为CPV-2a型；与CPV—VP2标准序列相比，同源性都在98％以上。二、犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定：以试验一得到的序列为依据，分离出病毒5株，用常规方法及分子生物学方法对病毒进行鉴定。结果表明：所分离病毒分属CPV-2a和CPV-2b。三、抗犬细小病毒单克隆抗体的制备：以CPV-2a病毒为抗原，应用常规杂交瘤技术筛选出1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为C-1-A9。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
前言  8-18
  一犬细小病毒的一般性质  8-9
  二犬细小病毒的分子生物学性质  9-13
  三犬细小病毒病诊断与防治研究进展  13-15
  参考文献  15-18
实验一犬细小病毒新抗原变异株VP2基因的克隆与序列分析  18-34
  1 材料  18-20
  2 方法  20-25
  3 结果  25-30
  4 讨论  30-32
  5 小结  32-33
  参考文献  33-34
实验二犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定  34-41
  1 材料  34
  2 方法  34-36
  3 结果  36-38
  4 讨论  38-39
  5 小结  39-40
  参考文献  40-41
实验三抗犬细小病毒新抗原变异株单克隆抗体的制备  41-51
  1 材料  41-42
  2 方法  42-45
  3 结果  45-48
  4 讨论  48-50
  参考文献  50-51
发表文章  51-59
致谢  59

犬细小病毒新抗原变异株的分离鉴定及单克隆抗体的制备

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