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乙烯刺激橡胶树胶乳多肽差异表达研究

作　者: 李明
导　师: 罗世巧
学　校: 海南大学
专　业: 植物学
关键词: 巴西橡胶树多肽乙烯差异表达
分类号: S794.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

割胶及乙烯刺激均可以在一定程度上提高橡胶树胶乳产量。目前研究认为乙烯利对橡胶树的作用,是促进排胶,影响胶乳的代谢。而橡胶树胶乳被认为是乳管细胞内的活性原生质,在乙烯刺激的条件下,必然发生生理上的变化使胶树逆境适应性增强,以适应乙烯刺激。作为乳管细胞生命活动体现者的胶乳蛋白,尤其是具有特殊生理活性的小分子蛋白质在乙烯刺激后的变化值得关注。研究这些蛋白质在不同乙烯刺激时间后的差异表达,筛选出与乙烯刺激密切相关的蛋白质,对乙烯刺激橡胶树的增产机制研究有一定的指导作用。通过试验研究乙烯刺激未开割橡胶树胶乳,从多肽的角度,对乙烯刺激后胶乳内蛋白表达的差异情况进行研究,探讨乙烯刺激和胶乳多肽之间的关系,初步得出如下结论：对3种不同时间乙烯刺激处理胶乳蛋白的双向电泳凝胶图谱进行分析,在凝胶中分布在分子量30KD以下的表达量差异达3倍及3倍以上的多肽79个。进一步对这些差异点进行MALDI-TOF-MS,得到16个蛋白点的鉴定结果。包括与抗性、胁迫相关功能的蛋白Cu/Zn超氧化物歧化酶、几丁质酶、病程相关蛋白(CC-NBS-LRR class)、β-1,3-葡聚糖酶；与橡胶生物合成有关的功能蛋白橡胶延伸因子、小橡胶粒子蛋白；参与细胞质骨架动态变化的功能蛋白α-微管蛋白；转录调控等生理过程的蛋白R2R3-myb基因转录因子、真核生物的翻译起始因子5A、具有调节活性的核糖核酸酶A等。随乙烯刺激时间的延长,Cu/Zn超氧化物歧化酶、真核生物的翻译起始因子5A、蛋白R2R3-myb基因转录因子、病程相关蛋白等提高细胞抗性的多肽表达量存在上调趋势,表现出对乙烯刺激胁迫作用的一致性,增强胶树的逆境适应性。而与橡胶生物合成代谢相关的橡胶延伸因子、小橡胶粒子蛋白变化复杂,乙烯刺激是否直接影响橡胶生物合成有待进一步验证。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-8
1 前言  8-15
  1.1 乙烯刺激与橡胶生物合成  9-11
    1.1.1 橡胶生物合成  9
    1.1.2 乙烯刺激与橡胶树产胶排胶  9-10
    1.1.3 乙烯刺激增产机制  10-11
  1.2 橡胶树胶乳多肽研究  11-14
    1.2.1 肽类物质的研究  11-12
    1.2.2 植物蛋白活性肽研究  12
    1.2.3 植物中多肽类物质研究方法及现状  12-13
    1.2.4 乙烯刺激橡胶树胶乳多肽的研究进展及意义  13-14
  1.3 研究技术路线  14-15
2 试验材料与方法  15-30
  2.1 材料  15
  2.2 仪器  15
  2.3 试剂  15-16
  2.4 方法与步骤  16-30
    2.4.1 样品制备  16-17
      2.4.1.1 胶乳总蛋白的制备  16
      2.4.1.2 C-乳清蛋白和黄色体蛋白的制备  16-17
    2.4.2 样品蛋白浓度测定  17-18
      2.4.2.1 蛋白质的溶解  17
      2.4.2.2 蛋白质浓度测定  17-18
    2.4.3 样品蛋白SDS-PAGE  18-26
      2.4.3.1 第一向固相pH梯度等电聚焦(IEF)  18-20
      2.4.3.2 胶条平衡  20-21
      2.4.3.3 第二向垂直平板电泳SDS-PAGE  21-23
      2.4.3.4 凝胶染色  23-26
    2.4.4 胶图分析  26-27
    2.4.5 质谱鉴定  27-30
      2.4.5.1 蛋白质的原位酶解  27-28
      2.4.5.2 质谱测定  28
      2.4.5.3 数据库查询  28-30
3 结果与分析  30-57
  3.1 胶乳各组分蛋白单向电泳结果与分析  30-35
  3.2 黄色体双向电泳凝胶图谱与分析  35-42
  3.3 C-乳清双向电泳凝胶图谱与分析  42-51
  3.4 全胶乳双向电泳凝胶图谱与分析  51-57
4 结论与讨论  57-61
  4.1 结论  57-59
  4.2 讨论  59-61
    4.2.1 关于分离多肽方法  59
    4.2.2 关于双向电泳及质谱  59
    4.2.3 关于试验时间处理和蛋白提取  59
    4.2.4 关于本试验的展望  59-61
参考文献  61-67
附录  67-68
致谢  68

乙烯刺激橡胶树胶乳多肽差异表达研究

内容摘要

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