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油松胚性愈伤组织诱导研究

作　者: 万婷
导　师: 孔冬梅
学　校: 山西大学
专　业: 植物学
关键词: 油松合子胚胚性愈伤组织植物生长调节剂
分类号: S791.254
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

油松(Pinus tabulaeformis Carr.)是我国北方最重要的用材和造林树种之一。近年来,林业上主要依靠实生苗和优树嫁接的繁殖方法,存在繁殖系数低,周期长等缺点,远远不能满足生产的要求。组织培养技术可克服传统繁殖方法存在的诸多障碍,其中体细胞胚胎发生因具有繁殖系数高、结构完整、易于保存、可制作人工种子等优点,比器官发生具有更广阔的应用前景。但油松体胚诱导的研究在国内外尚属空白。本研究以油松成熟和未成熟合子胚为材料进行胚性愈伤组织诱导,探讨取材时期和植物生长调节剂配比对油松胚性愈伤组织诱导的影响,为建立该树种体细胞胚胎发生技术提供实验资料和技术支持,为油松离体快速繁殖及遗传转化研究奠定基础。研究结果如下：(1)合子胚的发育阶段对油松愈伤组织及胚性愈伤组织的诱导具有明显影响。本研究发现7月初到8月中旬处于胚胎选择时期的合子胚能诱导愈伤组织发生。在7月底采集的外植体上获得最高的愈伤组织诱导率60%,但几乎均为非胚性愈伤组织。8月1日采集的外植体胚性愈伤组织的诱导率最高,达4.5%,但在之后的发育中逐渐死亡。而7月初取材的外植体诱导生成的胚性愈伤组织后期分化潜能高,增殖能力最强,但诱导率低仅有1.7%。(2)植物生长调节剂配比对油松愈伤组织及胚性愈伤组织的诱导有影响,且不同发育时期的合子胚受激素的影响不同。本研究在DCR培养基+5.0mg/L2,4-D+1.0 mg/L BA时,获得愈伤组织的最高诱导率,达60%。由于获得的胚性愈伤组织极少,未能找出植物生长调节剂对愈伤组织诱导影响的规律性。但直观分析认为,DCR培养基+1.0mg/L 2,4-D的培养条件较适宜于油松胚性愈伤组织的诱导。(3)不含植物生长调节剂的DCR培养基适合油松胚性愈伤组织的增殖,且用于增殖的愈伤组织以5×5mm2为佳。(4)胚性愈伤组织的分化和后期发育中,ABA的作用明显大于NAA和IBA；肌醇的存在有利于胚性愈伤组织胚性的保持。(5)在DCR, SH, LOB、B5和MSG等5种培养基中,DCR培养基上可获得最高的胚性愈伤组织诱导率(7.5%),其次为LOB。(6)油松胚性愈伤组织表面鲜白色、湿度大,粘性高,表面呈丝状或较大块状凸起,由细胞质浓、细胞体积较小的胚头细胞和一些高度液泡化并或多或少延长的胚柄细胞共同组成。胚性愈伤组织来自于合子胚,而体细胞胚则起源于胚性愈伤组织的单个细胞,分化形成体细胞胚的过程类似合子胚的形成过程。

全文目录

中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
第一章文献综述  13-24
  1.1 植物体细胞胚胎发生概述  13
  1.2 针叶树体细胞胚胎发生研究及应用进展  13-22
    1.2.1 影响体细胞胚胎发生的因素  14-18
    1.2.2 体细胞胚胎发生的细胞学研究  18-19
    1.2.3 体细胞胚胎发生的生理生化变化  19-20
    1.2.4 体细胞胚胎发生的分子生物学研究  20
    1.2.5 体细胞胚胎发生应用于基因转导  20-21
    1.2.6 体细胞胚胎发生技术的其它应用  21-22
  1.3 油松离体培养研究概况  22
  1.4 本研究的目的和意义  22-24
第二章材料与方法  24-27
  2.1 试验材料  24
  2.2 试验方法  24-26
    2.2.1 实验材料的保存和灭菌  24
    2.2.2 外植体的制备  24
    2.2.3 胚性愈伤组织的诱导  24-25
    2.2.4 胚性愈伤组织的增殖  25
    2.2.5 体细胞胚的分化和后期发育  25-26
  2.3 胚性愈伤组织和合子胚发育的细胞组织学观察  26-27
    2.3.1 胚性愈伤组织的细胞学观察  26
    2.3.2 合子胚发育的解剖学观察  26-27
第三章结果与分析  27-38
  3.1 胚性愈伤组织的诱导  27-34
    3.1.1 油松种子发育状况解剖学观察  27
    3.1.2 油松胚性愈伤组织发生的细胞学观察  27-29
    3.1.3 合子胚的发育状况及其对油松胚性愈伤组织诱导的影响  29-30
    3.1.4 植物生长调节剂及其配比对油松胚性愈伤组织诱导的影响  30-33
    3.1.5 培养基条件对胚性愈伤组织诱导的影响  33-34
  3.2 胚性愈伤组织的增殖  34-35
  3.3 体细胞胚的诱导及后期发育  35-36
  3.4 体细胞胚分化发育的细胞学过程  36-38
第四章讨论  38-42
  4.1 油松胚性愈伤组织的诱导  38-39
    4.1.1 取材时期对胚性愈伤组织诱导的影响  38
    4.1.2 植物生长调节剂对胚性愈伤组织诱导的影响  38-39
    4.1.3 培养基条件对胚性愈伤组织诱导的影响  39
  4.2 胚性愈伤组织的增殖  39-40
  4.3 体细胞胚的分化和后期发育  40-42
第五章结论  42-44
  5.1 主要结论  42
  5.2 本研究的创新点  42-43
  5.3 存在问题及建议  43-44
图版  44-48
参考文献  48-57
附录  57-61
攻读学位期间取得的研究成果  61-62
致谢  62-63
个人简况及联系方式  63-65

油松胚性愈伤组织诱导研究

内容摘要

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