学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鸡生长与免疫抑制综合征病毒单克隆抗体的制备和免疫组化法的建立

作　者: 刘明成
导　师: 刘兴友；王艳玲
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 鸡生长与免疫抑制综合征病毒 单克隆抗体 ELISA 免疫组化
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 35次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


将鸡生长与免疫抑制综合征病毒(Chicken stunt and immunosupression synd rome virus, CSISV)尿囊腔接种SPF鸡胚繁殖病毒,用差速离心法纯化病毒,用纯化的病毒免疫雌性Balb/c小鼠。免疫后小鼠的脾脏细胞与NSO骨髓瘤细胞在PEG-1500的诱导下进行融合,融合率达96.88%,阳性率为4.84%。经过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆,获得了一株能分泌CSISV抗体的杂交瘤细胞-3H10。经间接ELISA测定,3H10细胞上清的效价为1：320,用3H10细胞制备的小鼠腹水效价为1：8.2×106。经连续传代、冻存、复苏,3H10杂交瘤细胞株能稳定分泌抗体(3H10-McAb).用捕获ELISA法对3H10-McAb的亚类鉴定为IgG2a；用间接ELISA法对3H10-McAb进行了特异性鉴定,结果显示,3H10-McAb不与空白尿囊液发生反应,也不与IBDV、NDV、IBV等病毒发生交叉反应；Western-blot试验证明3H10-McAb能与CSISV病毒p30蛋白发生特异反应。用制备的单克隆抗体,以单抗1：80稀释,4℃过夜；二抗1：30稀释,37℃下作用30min；DAB显色5分钟；Harrys苏木素1：5稀释后,复染25s为最佳条件。建立了HRP标记的免疫组化法,检测到人工感染CSISV的肉仔鸡肝脏和肾脏均为阳性,表明3H10-McAb能与组织中的病毒良好结合,能有效检测到感染组织中的CSISV。CSISV单克隆抗体的成功制备,为建立该病的免疫学诊断方法奠定了基础,也为进一步研究该病奠定了良好的基础。

全文目录


致谢  4-9
摘要  9-10
第一部分 文献综述  10-20
  1.病毒性免疫抑制病的研究进展  10-16
    1.1 传染性法氏囊病  10
      1.1.1 致病机理  10
      1.1.2 免疫抑制的表现  10
    1.2 马立克氏病  10-11
      1.2.1 致病机理  10-11
      1.2.2 免疫抑制的表现  11
    1.3 鸡传染性贫血  11-12
      1.3.1 致病机理  11-12
      1.3.2 免疫抑制的表现  12
    1.4 禽白血病  12-13
      1.4.1 致病机理  12
      1.4.2 免疫抑制的表现  12-13
    1.5 网状内皮组织增生病  13
      1.5.1 致病机理  13
      1.5.2 免疫抑制的表现  13
    1.6 病毒性免疫抑制病的现状  13-14
      1.6.1 病毒性免疫抑制病的普遍性和严重性  13-14
      1.6.2 病毒性免疫抑制病的多重感染  14
    1.7 免疫抑制的解除  14-16
  2.鸡生长与免疫抑制综合征研究进展  16-17
    2.1 流行病学和临床症状  16
    2.2 病毒的结构形态  16
    2.3 病毒鉴定  16-17
    2.4 病毒检测方法的建立  17
  3.单克隆抗体技术  17-20
    3.1 单克隆抗体的特点  17-18
    3.2 单克隆抗体的现状  18
    3.3 单克隆抗体在畜禽病毒性疾病中的应用  18-20
      3.3.1 单克隆抗体对病毒抗原结构与抗原表位的研究  18-19
      3.3.2 单克隆抗体在畜禽病毒性传染病诊断中的应用  19
      3.3.3 单克隆抗体在抗病毒感染方面的应用  19-20
引言  20-22
第二部分 单克隆抗体的制备  22-36
  1.材料和方法  22-28
    1.1 材料  22-23
      1.1.1 病毒和抗体  22
      1.1.2 试验动物和细胞  22
      1.1.3 主要试剂  22
      1.1.4 主要仪器设备  22-23
      1.1.5 所需试剂的配制  23
    1.2 方法  23-28
      1.2.1 病毒的繁殖与纯化  23
      1.2.2 免疫抗原的制备  23-24
      1.2.3 Balb/c小鼠免疫  24
      1.2.4 间接ELISA方法的建立  24-25
      1.2.5 免疫小鼠的效价测定  25
      1.2.6 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立  25-27
      1.2.7 单克隆抗体腹水的制备  27
      1.2.8 杂交瘤细胞的冻存与复苏  27-28
  2.结果与分析  28-33
    2.1 病毒的纯化  28
    2.2 间接ELISA方法的建立  28-30
      2.2.1 最佳抗原包被浓度和酶浓度  28
      2.2.2 最佳抗原包被时间  28-29
      2.2.3 最佳封闭时间  29
      2.2.4 最佳二抗作用时间  29-30
    2.3 免疫小鼠的抗体效价  30
    2.4 杂交瘤细胞株的建立  30-31
    2.5 腹水的制备  31-32
    2.6 细胞培养液上清和腹水效价测定  32-33
  3.讨论  33-36
    3.1 酶标板的选择和洗涤  33
    3.2 小鼠免疫  33
    3.3 细胞融合  33-34
    3.4 细胞株的筛选  34
    3.5 杂交瘤细胞的克隆和冻存  34
    3.6 杂交瘤细胞的复苏  34-36
第三部分 单克隆抗体的鉴定  36-43
  1.材料与方法  36-39
    1.1 材料  36-37
      1.1.1 病毒和抗体  36
      1.1.2 主要试剂  36
      1.1.3 主要仪器  36
      1.1.4 所需试剂的配制  36-37
    1.2 方法  37-39
      1.2.1 单克隆抗体亚类的鉴定  38
      1.2.2 单克隆抗体特异性鉴定  38-39
  2.结果与分析  39-41
    2.1 单克隆抗体亚类的鉴定  39-40
    2.2 单克隆抗体与其它病毒的交叉反应  40
    2.3 单克隆抗体的WESTERN-BLOT结果  40-41
  3.讨论  41-43
    3.1 亚类鉴定  41
    3.2 特异性鉴定  41
    3.3 SDS-PAGE中的一些问题  41-43
第四部分 CSISV免疫组化检测法的建立  43-52
  1.材料和方法  43-45
    1.1 材料  43
      1.1.1 病毒  43
      1.1.2 试验动物  43
      1.1.3 主要试剂  43
      1.1.4 主要仪器  43
      1.1.5 所需试剂的配制  43
    1.2 方法  43-45
      1.2.1 组织切片的制备  44
      1.2.2 免疫组化染色  44-45
      1.2.3 免疫组化染色条件的优化  45
  2.结果与分析  45-50
    2.1 免疫组化染色条件的优化结果  45-48
    2.2 染色条件优化后的免疫组化结果  48-50
  3.讨论  50-52
    3.1 组织脱片  50
    3.2 抗原修复  50
    3.3 苏木素复染  50
    3.4 非特异性反应  50-52
结论  52-53
参考文献  53-61
英文摘要  61-62
附录  62-63
附图  63-70

相似论文

  1. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  2. 微纤维相关蛋白4在肝纤维化组织中的表达和外周血浓度与肝病理分级的相关性研究,R575.2
  3. 企鹅珍珠贝Cd-MT酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制,X835
  4. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
  5. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  6. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  7. 免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒融合蛋白方法的建立,R373
  8. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  9. IBDV模拟表位与vp2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达与应用,S852.65
  10. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  11. 犬细小病毒2型VP2基因在昆虫细胞中的表达及血清抗体间接ELISA检测方法的建立,S852.65
  12. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  13. 丙草胺和乙草胺的酶联免疫吸附分析方法研究,S482.4
  14. 抗噻菌灵单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立,S482.2
  15. 氯噻啉酶联免疫吸附分析方法研究,S482.3
  16. MMP-7和溶菌酶在DSS诱导的Balb/c小鼠溃疡性结肠炎模型发病机制中的作用,S858.91
  17. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  18. 猪流感病毒NS1蛋白间接ELISA检测方法的建立及NS、NP蛋白细胞定位研究,S858.28
  19. 猪TNF-α单克隆抗体制备与PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞TNF-α变化规律研究,S858.28
  20. J亚型禽白血病病毒抗体检测方法的建立及LTR体外启动活性分析,S858.31
  21. H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及其AC-ELISA检测方法的建立,S855.3

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸡
© 2012 www.xueweilunwen.com