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检测五种小分子化学物质的蛋白芯片技术研究

作　者: 曹巧玲
导　师: 高志贤
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 小分子化学物质免疫芯片生物芯片
分类号: Q819
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 142次
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内容摘要

免疫芯片是蛋白芯片的一种，芯片上的探针点阵，通过特异性免疫反应捕获样品中的靶蛋白，然后通过激光扫描系统和软件进行图像扫描、分析、结果定性定量检测，该技术具有高通量、自动化、灵敏度高等优点。本论文是以小分子污染物为检测对象，开展免疫芯片技术研究，由于小分子多数不具备两个以上供抗体结合的位点，不适用双抗体夹心法测定，因此，对五种小分子的检测均采用竞争法。即将小分子先与蛋白质偶联，然后通过Cy3对蛋白的标记而间接标记小分子，检测时，利用非标记小分子对标准液中偶联物产生竞争强度确定待测物质的含量。该研究成功地将壬基酚、阿特拉津、雌二醇、罂粟碱和氯霉素等五种小分子物质与卵清蛋白或牛血清白蛋白进行偶联，偶联物经标记后均能与各自的抗体结合，同时以水为样品进行了定性定量检测。以阿特拉津为代表物，对抗体芯片的制备进行了条件优化，结果表明，当抗体浓度达到0.254mg／mL、封闭液选择2％OVA或3％BSA、反应温度37℃、样品稀释液pH 7.2、抗原抗体反应时间在120min时，可获得较理想的荧光信号值。荧光强度随固定抗体的浓度升高而增强，随待测物浓度增高而减弱，且在0.001～5μg／mL浓度范围内有较好的线性趋势。并实现了在同一张芯片上同时检测五种小分子物质。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
引言  6-12
第一部分五种化学小分子物质完全抗原的合成、标记与鉴定  12-24
  一、五种化学小分子物质素完全抗原的合成  12-19
    1 材料与仪器  12-13
    2 实验方法  13-16
    3 实验结果  16-17
    4 讨论  17-19
  二、五种小分子物质蛋白结合物的标记与鉴定  19-24
    1 材料与仪器  19
    2 实验方法  19-22
    3 实验结果与分析  22
    4 讨论  22-24
第二部分阿特拉津抗体芯片制作条件的优化  24-31
  1 材料与方法  24
  2 实验方法  24-25
  3 结果与分析  25-29
  4 质量控制  29
  5 讨论  29-31
第三部分阿特拉津抗原芯片的制备及封闭液的选择  31-35
  1 材料与仪器  31
  2 实验方法  31-32
  3 结果与分析  32-33
  4 讨论  33-35
第四部分同时检测五种化学小分子物质蛋白芯片研究  35-44
  一、五种小分子物质标准曲线的制作  35-40
    1 材料与仪器  35-36
    2 实验方法  36-37
    3 实验结果与分析  37-39
    4 讨论  39-40
  二、同时检测五种小分子物质的蛋白芯片制备  40-44
    1 材料与仪器  40-41
    2 实验方法  41-42
    3 结果与分析  42-43
    4 讨论  43-44
第五部分结论与展望  44-46
  结论  44-45
  展望  45-46
参考文献  46-51
致谢  51-52
综述  52-59

检测五种小分子化学物质的蛋白芯片技术研究

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