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兰州大尾羊脂肪代谢功能相关基因mRNA时空表达规律的研究

作　者: 徐红伟
导　师: 臧荣鑫；杨具田
学　校: 西北民族大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 兰州大尾羊 脂肪代谢 沉脂组织 时空表达规律 内参基因 qPCR
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


30只1月龄兰州大尾羊羔羊,随机分成6组。分别在1、3、5、7、9、11和13月龄时屠宰,采集大网膜脂肪组织、肝脏组织、肌肉组织、皮下脂肪组织、肾周脂肪组织和尾部脂肪组织,利用改进的TRIzol法提取总RNA,SuperScriptTMⅢFirst-Strand Synthesis System for RT-PCR试剂盒反转录获得各组织、各阶段cDNA。设计特异PCR引物,对选取的18S rRNA、GADPH、PGK1、SDHA、TUBB、YWHAZ和ACTB 7个管家基因在兰州大尾羊7个生长发育阶段、6种组织中的时空表达进行实时定量PCR(qPCR)进行分析,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper三种软件对各基因表达的稳定性进行分析,筛选出表达最稳定的GADPH和TUBB2或YWHAZ和TUBB2基因作为研究兰州大尾羊脂肪代谢功能相关基因时空qPCR表达的双基因内参因子。以已筛选出能够稳定表达的GADPH和TUBB2基因的稳定表达系数的几何平均数对FAS、DGAT1、HSL、H-FABP、UCP3、G6PD和ACCα7个目标功能基因的qPCR表达进行均一化处理后的研究表明,兰州大尾羊脂肪代谢功能相关基因FAS、DGAT1、HSL、FABP和G6PD在沉脂组织中表达模式总体上呈“上升→下降→又上升→又下降”的变化趋势,但在时空上差异较大。ACCα、HSL和G6PD基因在兰州大尾羊沉脂组织中的表达模式在不同组织间存在显著差异,尤其在尾部脂肪组织的变化不同于其他脂肪组织。UCP3基因主要在肝脏和肌肉组织中表达,在脂肪组织中表达量很低,几乎不表达。说明:FAS、DGAT1、HSL、FABP和G6PD基因与兰州大尾羊特有性状---尾部脂肪过度沉积有关,可以作为进一步研究兰州大尾羊脂肪局部沉积的候选基因。ACCα、HSL和G6PD基因可以作为进一步研究兰州大尾羊脂肪局部沉积的主要候选基因。UCP3基因与兰州大尾羊脂肪局部沉积无关。本研究为进一步探索兰州大尾羊脂肪代谢及脂肪沉积规律提供理论依据。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-11
第一部分 文献综述  11-31
  第一章 兰州大尾羊  11-14
    1. 兰州大尾羊生长环境及生物学特性  11-12
      1.1 兰州大尾羊生长环境  11
      1.2 兰州大尾羊生物学特性  11-12
    2 兰州大尾羊种质资源现状及存在的问题  12-13
    3. 兰州大尾羊研究现状  13-14
  第二章 反刍动物脂肪代谢及其相关基因研究进展  14-20
    1. 脂肪酸合成酶(FAS)基因  15-16
    2. 脂肪酸结合蛋白(FABP)基因  16
    3. 解偶联蛋白（UCP）基因  16-17
    4. 酰基辅酶A:二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1)基因  17
    5. 激素敏感性脂肪酶(HSL)基因  17-18
    6. 乙酰辅酶A 羧化酶（ACC）基因  18
    7. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）基因  18-20
  第三章 基因表达量分析技术  20-27
    1. 荧光定量PCR  20-23
      1.1 荧光定量PCR 概念  20
      1.2 荧光定量PCR 与普通PCR 的主要区别  20-21
      1.3 荧光定量PCR 的定量原理  21-22
      1.4 q Real time PCR 检测方法  22-23
    2. q Real Time PCR 解析方法  23-25
      2.1 标准曲线分析  23-24
      2.2 熔解曲线分析  24-25
    3. 定量方法  25-27
      3.1 绝对定量  25-26
      3.2 相对定量  26
      3.3 绝对定量与相对定量比较  26-27
  第四章 内参基因的选择  27-31
    1. 选择内参基因的必要性  27-28
    2. 内参基因应具备的条件  28
    3. 内参基因的稳定性评价  28-31
      3.1 geNorm  28-29
      3.2 NormFinder  29
      3.3 BestKeeper  29-30
      3.4 不同评价方法的选择  30-31
第二部分 实验部分  31-107
  第五章 兰州大尾羊基因表达转录分析中内参基因的选择  31-57
    1. 材料与方法  31-37
      1.1 实验动物及采样方式  31
      1.2 主要实验药品  31-32
      1.3 仪器设备  32
      1.4 候选内参基因的选择  32
      1.5 引物设计与合成  32-34
      1.6 总RNA 的提取  34-35
      1.7 反转录  35-36
      1.8 qPCR  36
      1.9 数据分析  36
      1.10 稳定性评价  36-37
    2. 试验结果与分析  37-53
      2.1 总RNA 的提取  37
      2.2 荧光定量PCR 反应  37-40
      2.3 不同发育阶段内参基因的选择  40-47
      2.4 不同组织内参基因的选择  47-53
    3. 讨论  53-56
      3.1 兰州大尾羊脂肪组织中RNA 的提取  53-54
      3.2 实时荧光定量PCR 方法的建立  54-55
      3.3 内参基因的选择  55-56
    4. 结论  56-57
  第六章 兰州大尾羊脂肪代谢相关基因mRNA 的时空表达规律研究  57-107
    1. 兰州大尾羊脂肪酸合成酶（FAS）基因mRNA 的时空表达规律的研究  57-66
      1.1 材料与方法  57-59
      1.2 试验结果与分析  59-63
      1.3 讨论  63-64
      1.4 小结  64-66
    2. 兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的时空表达规律的研究  66-73
      2.1 材料与方法  66-67
      2.2 试验结果与分析  67-71
      2.3 讨论  71
      2.4 小结  71-73
    3. 兰州大尾羊解偶联蛋白3（UCP-3）基因mRNA 时空表达规律的研究  73-79
      3.1 材料与方法  73-74
      3.2 试验结果与分析  74-77
      3.3 讨论  77
      3.4 小结  77-79
    4. 兰州大尾羊酰基辅酶 A:二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1)基因mRNA 时空表达规律的研究  79-86
      4.1 材料与方法  79-80
      4.2 试验结果与分析  80-84
      4.3 讨论  84-85
      4.4 小结  85-86
    5. 兰州大尾羊激素敏感性脂肪酶(HSL)基因mRNA时空表达规律的研究  86-93
      5.1 材料与方法  86-87
      5.2 试验结果与分析  87-91
      5.3 讨论  91-92
      5.4 小结  92-93
    6. 兰州大尾羊乙酰辅酶 A羧化酶α(ACCα)基因mRNA时空表达规律的研究  93-100
      6.1 材料与方法  93-94
      6.2 试验结果与分析  94-98
      6.3 讨论  98-99
      6.4 小结  99-100
    7. 兰州大尾羊葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）mRNA 基因时空表达规律的研究  100-107
      7.1 材料与方法  100-101
      7.2 试验结果与分析  101-105
      7.3 讨论  105-106
      7.4 小结  106-107
全文结论  107-108
  1. 内参基因选择结果  107
  2. 脂肪代谢相关基因时空表达规律的研究结果  107-108
参考文献  108-117
附录 硕士期间发表的论文  117-118
致谢  118-119
个人简介  119

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 羊
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