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猫杯状病毒全基因组序列分析和感染性克隆的构建

作　者: 郑翠玲
导　师: 宣华
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: FCV 全基因 序列分析 克隆 载体构建
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


对猫杯状病毒广东分离株FCV CH-GD株进行了全基因的克隆、测序和序列分析。用DNAStar软件对所测序列和GenBank中的参考毒株的序列进行比较分析。结果显示:除CH-GD株外,各参考毒株(美国的Urbana、F9、USDA、CFI-68、UTCVM-H1、UTCVM-H2、UTCVM-NH1、UTCVM-NH2、UTCVM-NH3株;德国的FCV-DD-2006-Ge、FCV2024株;日本的F4株;英国的F65株)之间的同源性均较高,在78.9%~99.9%之间,而CH-GD株与各参考毒株的同源性均较低,在75.4%~77.1%之间。美国的USDA株与德国的FCV2024株序列同源性高达99.9%,可能为同一毒株。进化树分析表明,此14株病毒可形成2个明显的分支,中国的CH-GD株形成一个分支,其余参考毒株形成另一个分支,但并无明显地域差异特征。本研究在一定程度上揭示了猫杯状病毒的遗传进化关系,为我国对猫杯状病毒的研究和杯状病毒疫苗的研制提供了一定的参考依据。采用重组PCR方法获得了FCV的全基因组,其阳性克隆质粒P’FCV+T线性化后,体外转录获得RNA,进而转染F81细胞,成功构建了FCV的感染性克隆。通过RT-PCR、酶切方法检测P’FCV+T的转录、转染情况。结果显示:经体外转录和转染后获得了FCV的感染性克隆,其病毒滴度与原毒相比无差异。FCV感染性克隆的成功构建,为杯状病毒嵌合载体疫苗的研制奠定了基础。

全文目录


提要  4-5
英文缩略词表  5-8
前言  8-11
第一篇 文献综述  11-39
  第一章 猫杯状病毒生物学特性研究进展  11-25
    1 病毒的生物学特性  12-15
    2 病毒基因组结构特点  15-20
    3 VPg 蛋白  20
    4 亚基因组  20-21
    5 疫苗  21-23
    6 防治措施  23-25
  第二章 RNA 病毒感染性克隆研究进展  25-39
    1 发展历史  25-28
    2 感染性克隆构建的原理和构建方法  28-34
    3 负链RNA病毒  34-35
    4 双链RNA 病毒  35
    5 感染性克隆的应用  35-38
    6 存在的问题  38-39
第二篇 研究内容  39-78
  第一章 FCV 全基因组的克隆及序列分析  39-62
    1 材料和方法  39-47
      1.1 材料  39-40
      1.2 方法  40-47
    2 结果  47-54
      2.1 RT-PCR 结果  47-48
      2.2 重组质粒的鉴定  48-49
      2.3 重组PCR 结果  49-50
      2.4 重组质粒的鉴定  50
      2.5 基因序列测定结果  50
      2.6 FCV 全基因序列分析  50-52
      2.7 开放阅读框及其编码的氨基酸序列分析  52-54
    3 讨论  54-60
      3.1 全基因组的克隆  54-55
      3.2 FCV 全基因组序列分析  55-60
    4 小结  60-62
  第二章 FCV 感染性克隆的构建  62-77
    1 材料和方法  62-69
      1.1 材料  62-63
      1.2 方法  63-69
    2 结果  69-74
      2.1 PCR 结果  69
      2.2 重组PCR 及酶切鉴定  69-70
      2.3 质粒的酶切鉴定  70-71
      2.4 体外转录  71
      2.5 体外转染  71-73
      2.6 感染性克隆的鉴定  73-74
    3 讨论  74-76
      3.1 关于FCV 全基因组的扩增  74
      3.2 关于感染性克隆的构建  74-76
      3.3 启动子的选择  76
      3.4 关于VPg 蛋白  76
    4 小结  76-77
  结论  77-78
参考文献  78-87
附录  87-95
中文摘要  95-97
英文摘要  97-99
致谢  99-100
导师简介  100-101
作者简介  101

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 家畜病毒学
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