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去甲斑蝥素固脂分散体肝动脉缓释栓塞微球的制备与药效学研究

作　者: 周欣颖
导　师: 张学农
学　校: 苏州大学
专　业: 药剂学
关键词: 海藻酸钠壳聚糖去甲斑蝥素固体脂质微球肝动脉栓塞
分类号: R943
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:本文将模型药物去甲斑蝥素(norcantharidin, NCTD)经过前处理制成去甲斑蝥素固脂分散体,再以生物材料海藻酸钠(alginate ,ALG)及壳聚糖(chitosan,CS)为载体,制备了去甲斑蝥素固脂分散体-海藻酸钠/壳聚糖肝动脉栓塞(transcatheter arterial chemoembolization, TACE)微球。并通过介入方法治疗肝癌,以期达到缓释、靶向、栓塞三重功效,减小药物刺激性,提高肝癌组织中药物浓度,加快肝癌细胞凋亡的目的,为临床治疗不可切除性肝癌提供借鉴。方法: (1)采用外部凝胶化法,制备甲斑蝥素固脂分散体微球(LSD/NTCD-ACM)。对壳聚糖与海藻酸钠比例、二者加入顺序、反应温度、乳化剂加入量、脂质的选择及其比例进行了单因素考察;并选定药脂比、固分体与载体比例、氯化钙浓度为因素,载药量、载药量、一周剩余释放率为因素进行了正交设计优化(2)应用扫描电镜观察微球的表面形态,采用红外光谱(FT-IR)、X-粉末衍射法(X-RD)和差示扫描量热法(DSC)验证微球的结构及生成机理。并对微球的粉体学性质、悬浮性及导管推注实验进行考察。(3)采用体外动态透析法在pH7.4磷酸盐缓冲液释放介质中测定去甲斑蝥素不同制剂及不同粒径载药微球的释药性能,并对微球的稳定性进行考察。(4)选用新西兰大白兔作为动物模型,采用开腹直视下肿瘤组织块包埋法、超声引导下穿刺针种植法和活检针种植法分别于兔肝左页进行肿瘤种植,并于不同时间用超声和CT检查肿瘤生长大小,进行方法比较。(5)将荷瘤兔随机分为4组,分别为:药物微球组(60~125/um)、药物微球组(125~200/um)、NCTD溶液组(NCTD 1.0 mg·kg-1)及空白对照组(未做任何处理)。各组荷瘤兔分别经股动脉插管至肝左动脉或肝固有动脉并注入准备好的制剂。治疗后,观察各组治疗效果以及TACE对肝功能的影响。结果:(1)单因素考察表明海藻酸钠与壳聚糖加入顺序,二者比例,乳化剂加入量及反应温度对微球形态影响较大,而固体脂质的选择及比例则对微球缓释性能影响较大。采用正交设计优化工艺制备所得的微球包封率87.31%,载药量9.46%,一周剩余释放率39.50%,满足栓塞微球的要求。(2)扫描电镜照片显示微球外观圆整,表面光滑,分散良好。FT-IR、X-RD和DSC图谱表明壳聚糖与海藻酸钠反应,虫白蜡物理包裹,去甲斑蝥素分散在微球骨架中。粉体学性质考察结果符合要求,流动性好,悬浮性好。导管推注实验表明微球不堵塞管道,推注顺利。(3)固分体微球一周突释率60%左右,其后缓缓释放15-20天,微球释放符合威布尔模型;药物微球粒径越大缓释效果越好。(4)三种肿瘤种植方法比较发现,包埋法对兔子的损伤大,恢复慢;穿刺针法异位种植率高;活检针法操作更加简便,肿瘤活性损伤小,不易从肝组织中掉出,成功率较前二者高。肿瘤于接种后均在2～4周生长最旺盛,4周后肿瘤中心出现变性坏死,并有周围淋巴结及肺转移。综合比较本文采用超声引导下活检针法种植。(5)治疗后,对比各组荷瘤兔的肿瘤体积、生长曲线、生命延长率及病理切片结果。在14 d的观察期内,药物微球组相对于NCTD溶液及对照组均有显著的治疗效果,其中粒径较小者对肿瘤杀伤作用强,但损伤同样较大,而NCTD组药效短暂无明显生命延长作用。毒性结果显示,处理组术后均呈现一过性的肝损伤,药物微球组损伤更为严重,恢复时间稍长,而小粒径组程度深于粒径较大者。结论:本文制备的LSD/NTCD-ACM释放性能良好,将NCTD前处理制成固脂分散体实现了小分子水溶性药物缓释性能的突破,且制得的微球具有较高的载药量和包封率,表面光滑圆整,并且悬浮性、流动性、稳定性等也均栓塞微球的要求。药效学实验表明LSD/NTCD-ACM经肝动脉栓塞对兔的VX2肝癌具有一定的治疗效果,且毒副作用合理可控。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-12
引言  12-26
第一章去甲斑蝥素固脂分散体-海藻酸钠/壳聚糖微球的制备与工艺优  26-39
  仪器和试剂  26-27
  方法与结果  27-38
    1. N CTD 体外含量分析方法的建立  27-29
      1.1 HPLC 色谱条件  27
      1.2 标准曲线  27-28
      1.3 精密度  28
      1.4 回收率  28-29
    2. 微球的制备  29-30
      2.1 空白微球  29
      2.2 载药微球  29-30
    3. 微球的质量评价  30
      3.1 载药量和包封率  30
      3.2 粒径  30
      3.3 均匀度及成球性  30
    4. 微球的单因素考察  30-35
      4.1 制备方法  30-31
      4.2 乳化剂加入量  31
      4.3 反应温度  31
      4.4 海藻酸钠/壳聚糖  31-32
      4.5 固分体材料  32-34
      4.6 药脂比  34
      4.7 交联剂考察  34-35
    5. 微球的处方优化  35-37
    6. 最优处方验证  37-38
  讨论与小结  38-39
第二章微球的表征与特性考察  39-48
  仪器和试剂  39-40
  方法与结果  40-47
    1. 微球的形态表征  40
    2. 微球的结构表征  40-44
      2.1 红外(FT-IR)图谱  40-42
      2.2 X 射线衍射(XRD)图谱  42-43
      2.3 差示扫描量热(DSC)分析  43-44
    3. 微球的粉体学考察  44
      3.1 休止角  44
      3.2 压缩度  44
      3.3 圆整度  44
    4. 微球的吸水膨胀度考察  44-45
    5. 悬浮性及导管推注实验  45-47
  讨论与小结  47-48
第三章微球的体外释放及稳定性考察  48-54
  仪器和试剂  48-49
  方法与结果  49-53
    1. 体外释放实验  49-51
      1.1 不同制剂的体外释放对比  49-50
      1.2 不同粒径微球体外释放对比  50-51
    2. 微球的稳定性实验  51-53
      2.1 高温实验  51
      2.2 吸湿性实验  51-52
      2.3 强光照射实验  52
      2.4 加速实验和长期稳定性实验  52-53
  讨论与小结  53-54
第四章兔VX-2 肝癌模型的建立  54-65
  仪器与材料  54-55
  方法与结果  55-64
    1.V X-2 肝癌动物模型的制作  55-60
      1.1 实验动物分组  55
      1.2 瘤块的取材与制备  55-57
      1.3 荷瘤兔的传代  57
      1.4 瘤块的肝内种植  57-60
    2. 方法评价  60-64
      2.1 植瘤成功率  60-61
      2.2 种植后超声检查  61-62
      2.3 种植后CT 检查  62
      2.4 病理学表现  62-64
  讨论与小结  64-65
第五章微球栓塞治疗兔VX-2 肝癌的疗效观察  65-75
  仪器与材料  65-66
  方法与结果  66-74
    1. VX-2 肿瘤肝动脉栓塞实验  66-67
      1.1 给药前准备  66
      1.2 动物分组与用药  66
      1.3 栓塞治疗方法  66-67
    2. 效果评价  67-74
      2.1 兔子死亡情况及生存时间观察  67
      2.2 肿瘤体积、肿瘤生长率  67-68
      2.3 DSA 监测下肿瘤即时栓塞效果观察  68-70
      2.4 病理学观察  70-72
      2.5 肝肾毒性评价  72-74
  讨论与小结  74-75
全文总结  75-77
参考文献  77-84
攻读学位期间发表的论文  84-85
致谢  85-86

去甲斑蝥素固脂分散体肝动脉缓释栓塞微球的制备与药效学研究

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