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麻疯树核糖体失活蛋白（curcin）的化学修饰与光谱学研究

作　者: 崔维科
导　师: 陈放
学　校: 四川大学
专　业: 植物学
关键词: 麻疯树核糖体失活蛋白(curcin) 化学修饰无细胞体系蛋白合成抑制活性荧光光谱圆二色谱
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein，简称RIPs)是一类rRNAN—糖苷酶(EC 3．2．2．22)，可专一水解大鼠28S rRNA的A4324位的N—C糖苷键，使核糖体失活从而抑制蛋白质的合成。根据RIPs一级结构的特征，可将其分成三类。其中Ⅰ型RIPs最主要的一个生理生化特征就是对无细胞体系的蛋白质合成具有强烈抑制作用，该类蛋白生化性质稳定，制备简便，可与单克隆抗体等制备免疫毒素，在肿瘤治疗和骨髓移植等方面具有广泛应运前景。本实验室从四川麻疯树种仁中分离纯化得到一种Ⅰ型RIPs(curcin)。目前对curcin的基因克隆及序列分析已经作了大量工作，但对curcin的高级结构还知之甚少。因此本文在前人研究的基础上利用特异性的化学修饰剂对curcin五种氨基酸进行化学修饰，以其得到与curcin核糖体失活活性相关的结构信息。麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀得粗品，将粗品于Sephadex G-100分子筛层析得纯品，经SDS-PAGE检测为单一蛋白带。通过无细胞体系蛋白合成抑制活性的测定，结合荧光光谱和圆二色谱技术，对麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)部分氨基酸残基进行特异性化学修饰，探讨维持curcin活性的必需氨基酸基团及修饰对curcin结构的影响。结果表明，组氨酸和半胱氨酸的化学修饰对curcin活性没有影响。色氨酸和赖氨酸的修饰结

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图片目录  6
表格目录  6-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
第一章麻疯树核糖体失活蛋白(curicn)的化学修饰及光谱学研究  11-39
  1.引言  11-14
  2.实验材料、试剂与仪器  14-15
    2.1 实验材料、试剂  14-15
    2.2 实验仪器  15
  3.实验方法  15-19
    3.1 麻疯树核糖体失活蛋白的制备  16
    3.2 蛋白质浓度测定  16
    3.3 curcin无细胞体系蛋白合成抑止活性测定  16-17
    3.4 curcin化学修饰  17-18
      3.4.1 精氨酸残基的修饰  17
      3.4.2 赖氨酸残基的修饰  17
      3.4.3 色氨酸残基的修饰  17-18
      3.4.4 组氨酸残基的修饰  18
      3.4.5 半胱氨酸残基的修饰  18
    3.5 curcin光谱测定  18
      3.5.1 荧光光谱测定  18
      3.5.2 圆二色谱测定  18
    3.6 curcin荧光淬灭研究  18-19
      3.6.1 Ki对curcin荧光的淬灭作用  19
      3.6.2 丙烯酰胺对curcin的淬灭作用  19
      3.6.3 碘乙酸对curcin的淬灭作用  19
  4.结果  19-26
    4.1 curcin的提取与纯度检测  19-20
    4.2 化学修饰对curcin活性的影响  20-22
      4.2.1 精氨酸化学修饰  20-21
      4.2.2 赖氨酸化学修饰  21
      4.2.3 色氨酸化学修饰  21
      4.2.4 组氨酸和半胱氨酸化学修饰  21-22
    4.3 化学修饰对curcin荧光光谱的影响  22-26
    4.4 氨基酸化学修饰对curcinCD光谱的影响  26
  5.讨论  26-33
    5.1 curcin化学修饰  27-30
      5.1.1 精氨酸化学修饰  27-28
      5.1.2 赖氨酸化学修饰  28-29
      5.1.3.色氨酸化学修饰  29
      5.1.4 组氨酸化学修饰  29-30
      5.1.5 半胱氨酸化学修饰  30
    5.2 cuicin的荧光淬灭  30-33
      5.2.1 KI的淬灭作用  30
      5.2.2 丙烯酰胺的淬灭作用  30-33
      5.2.3 碘乙酸的荧光淬灭作用  33
  小结  33-35
  参考文献  35-39
第二章核体失活蛋白的活性研究进展(文献综述)  39-63
  1.前言  40
  2 定义和分类  40-41
  3 结构  41-42
    3.1 初级结构：不同植物的RIPs的序列相似性  41-42
    3.2 三级结构：有助于对具有多种活性的RIPs的理解  42
  4 生物学和酶学活性  42-51
    4.1 生物学活性  42-43
    4.2 经典的活性  43-48
      4.2.1 对于核糖体RNA的位点特异性的RNA N-糖苷酶活性  45-46
      4.2.2 多聚核苷：腺苷糖苷酶活性  46-47
      4.2.3 对带帽m RNA的降解作用(depurination)：一种多聚核苷：腺苷糖苷酶活性  47
      4.2.4 多聚核苷：鸟苷糖苷酶活性  47-48
    4.3 引人注目的酶的活性  48-51
      4.3.1 RNA酶活性  48-49
      4.3.2 DNA酶活性  49-51
  5 RIPs的酶活性调节物  51-52
  6 作为植物保护蛋白的RIPs  52-55
    6.1 RIPs的生理功能  52-53
    6.2 作为抗病毒蛋白的RIPs  53-55
      6.2.1 体外抗病毒活性  53-54
      6.2.2 在转基因植物中RIPs的抗病毒活性  54-55
  7 结论  55-56
  参考文献  56-63
致谢  63-64
在读期间发表论文  64-65

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