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柑橘愈伤组织倍性变异中细胞凋亡途径的社会化控制

作　者: 周舟
导　师: 邓秀新
学　校: 华中农业大学
专　业: 果树学
关键词: 柑橘愈伤组织四倍体细胞共培养细胞凋亡隔离培养
分类号: S666
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

植物组织培养中普遍存在体细胞染色体数目变异现象，这是由于异常有丝分裂造成的。已有研究表明，部分植物在离体培养条件下，其染色体的多倍化变异往往会随着时间延长而增加。然而，柑橘愈伤组织在继代10多年后仍然具有较强的胚胎发生能力，染色体倍性组成却保持了相对稳定。前人推测二倍体愈伤组织中的四倍体细胞在不断产生的同时以较高频率的细胞凋亡方式被淘汰，从而维持四倍体细胞比例的稳定。为了验证这一推测，本文将带有绿色荧光标记的国庆一号二倍体细胞和低密度包埋培养所得四倍体细胞纯系混合悬浮培养，挑取四倍体细胞包埋切片，发现部分四倍体细胞呈典型的细胞凋亡特征。改变培养条件，统计凋亡率与共培养时间和所占比例的关系。结果表明，共培养2-7天内，混合培养的四倍体凋亡率与单独培养时差异显著；当样品中四倍体细胞数多于二倍体时，四倍体表现出更高的凋亡率；凋亡率随着时间的增加而增加，其中第2天凋亡率显著上升。原位末端标记分析显示，等量混合共培养10天时细胞凋亡率高达36.9％，高于形态学记数结果，因为DNA的损伤早于形态学变化。为了探讨不同倍性细胞相互作用的途径，设计了孔径为0.22μm的滤膜隔离培养装置，细胞间无法直接接触，切片记数统计结果表明，共培养4天后，四倍体凋亡率与单独培养时相比差异不显著，从而证明在这一模式中，细胞团间的接触是相互作用的途径。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-8
缩略词表  8-9
1 前言  9-13
  1.1 问题的提出  9-10
  1.2 前人研究进展  10-12
    1.2.1 柑橘愈伤组织离体保存过程中的遗传变异的研究  10-11
    1.2.2 细胞群体内细胞间互作  11
    1.2.3 植物细胞凋亡的研究进展  11-12
  1.3 本研究的目的和内容  12-13
2 材料和方法  13-18
  2.1 试验材料  13
  2.2 试验原理和方法  13-18
    2.2.1 试验原理  13-14
      2.2.1.1 细胞凋亡检测原理  13-14
      2.2.1.2 多倍体细胞的分离  14
    2.2.2 实验方法  14-18
      2.2.2.1 低密度包埋培养和单细胞系的建立  14
      2.2.2.2 流式细胞仪检测倍性  14
      2.2.2.3 共培养操作  14-15
      2.2.2.4 柑橘原生质体的制备和染色观察  15
      2.2.2.5 半薄切片染色观察  15
      2.2.2.6 细胞凋亡试剂盒操作  15-16
      2.2.2.7 不同倍性愈伤细胞的隔离培养  16-18
3 结果与分析  18-24
  3.1 与二倍体共培养时四倍体愈伤细胞的形态学观察  18-20
    3.1.1 原生质体DAPI染色结果  18
    3.1.2 不同培养比例和凋亡率的关系  18-20
  3.2 凋亡率的变化因素  20-22
    3.2.1 不同培养比例和凋亡率的关系  20-21
    3.2.2 凋亡率随时间变化散点图  21-22
  3.3 TUNEL统计分析结果  22-23
  3.4 隔离培养实验结果  23-24
4. 讨论  24-28
  4.1 细胞间互作现象及凋亡途径  24-25
  4.2 信号的传导和凋亡区间的形成  25
  4.3 细胞间传递作用信号探索  25-28
参考文献  28-32
图版和图版说明  32-39
致谢  39

柑橘愈伤组织倍性变异中细胞凋亡途径的社会化控制

内容摘要

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