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CK2激酶磷酸化AP-2α并抑制AP-2α的转录活性

作　者: 张文峰
导　师: 张健；周建林
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学及分子生物学
关键词: AP-2转录因子家族体外磷酸化蛋白质降解相互作用转录抑制
分类号: Q343
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

AP-2转录因子家族由AP-2α、AP-2β、AP-2γ、AP-2δ以及AP-2ε五个相关成员组成，调控着诸如细胞凋亡、细胞生长、胚胎发育期组织分化等一系列细胞事件。其羧基末端存在helix-span-helix基序，与中央基本结构域一起介导了DNA的结合与二聚化的形成，在其氨基末端存在着转录激活结构域。以前的研究结果表明AP-2的表达水平与肿瘤的发生有着密切关系，在乳腺癌、卵巢癌中存在着AP-2的高表达，在人类黑色素瘤、神经胶质瘤中却缺少AP-2的表达。通过与其他蛋白的相互作用以及翻译后修饰是调节AP-2活性的两个重要方面。我们在本实验中发现AP-2α蛋白能够与CK2激酶β亚基相互作用，并在体外用GST Pull-down实验和在体内用免疫共沉淀实验分别证明了他们的相互作用；同时我们通过体外磷酸化实验证明了CK2激酶磷酸化AP-2α蛋白以及找到了AP-2α蛋白的磷酸化位点即Ser429。进一步的实验发现，CK2激酶磷酸化AP-2α后引起AP-2α蛋白的降解可能是导致抑制其转录活性的一种原因。我们的这些发现可能是AP-2α进行空间与时间调控的一种机制，有助于我们理解AP-2家族参与一系列重大细胞事件的调控角色。

全文目录

英文缩写表  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
前言  9-28
第一部分材料与方法  28-49
  1.材料  28-33
    1.1 主要仪器设备  28-29
    1.2 菌种和细胞株  29
    1.3 载体和工具酶  29
    1.4 抗体  29-30
    1.5 试剂盒  30
    1.6 其它试剂  30
    1.7 所需溶液  30-33
  2.实验方法  33-49
    2.1 融合蛋白质的表达与纯化  33-38
    2.2 细胞培养  38-39
    2.3 AP-2α与CK2β之间的相互作用分析  39-41
    2.4 CK2激酶体外磷酸化AP-2α蛋白  41-42
    2.5 体外磷酸化位点的锚定  42-45
    2.6 CK2激酶对AP-2α转录活性的影响  45-47
    2.7 蛋白质降解实验  47-49
第二部分结果与分析  49-59
  1.融合蛋白质的表达与纯化  49-50
  2.蛋白质相互作用的分析  50-52
    2.1 免疫共沉淀分析  50-51
    2.2 体外Pull down分析  51-52
  3.CK2激酶体外磷酸化AP-2α蛋白  52
  4.磷酸化位点的锚定  52-54
  5.CK2激酶对AP-2α转录活性的影响  54-55
  6.CK2激酶磷酸化AP-2α引起AP-2α的降解  55-59
第三部分讨论  59-63
参考文献  63-73
致谢  73-75
附录1  75-76
附录2  76

CK2激酶磷酸化AP-2α并抑制AP-2α的转录活性

内容摘要

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