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犬科和猫科动物细小病毒分离株VP2基因的遗传进化分析研究

作　者: 王淑君
导　师: 陈创夫；夏咸柱
学　校: 石河子大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 犬细小病毒猫泛白细胞减少症病毒克隆遗传进化分析
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 30次
引　用: 1次
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内容摘要

肉食兽细小病毒属于细小病毒科、细小病毒属中的一类病毒。由肉食兽细小病毒引起的疾病存在于世界各地。在我国,无论是家养动物还是野生动物均有细小病毒相关疫病的流行,其中猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)是危害我国猫科、浣熊科和鼬科等多种家养、圈养、野生和经济动物的主要传染病病原体之一。犬细小病毒感染的动物之多,其致病性之强,致死率之高,对我国军犬、警犬、观赏犬及家养犬的饲养造成了巨大的威胁。所以细小病毒的研究受到众多学者的关注。该病毒VP2基因决定病毒的宿主范围、血凝性和抗原性。肉食兽细小病毒快速的演化速度与VP2蛋白上几个关键氨基酸残基的变异并迅速适应宿主犬有关。根据Genbank登录的猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)、犬细小病毒(CPV)、水貂肠炎病毒(MEV) VP2序列进行比较,选择其保守序列,设计一对检测肉食兽细小病毒的特异性通用引物,从2007年-2008年之间我国不同地方送检的疑似CPV感染的30份犬科动物样品中PCR检测出18份CPV阳性样品;并从20份疑似FPV感染的猫科动物病料样品中检测出10份FPV阳性样品。用F81细胞从18份CPV阳性样品中分离鉴定到9株CPV,从10份FPV阳性样品中分离鉴定到7株FPV,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等进一步鉴定这16株病毒。通过设计肉食兽细小病毒VP2全长特异性通用引物,经PCR扩增了VP2全长基因并进行克隆和序列分析。用分离的CPV分离株对健康犬进行人工感染实验,十天内所感染犬均出现典型的犬细小病毒感染临床症状,其中CPV-CN-5株感染犬以死亡告终。病毒检测结果显示不同时间我国不同地方送检病料细小病毒阳性率比较高,初步推断CPV和FPV在我国犬科和猫科动物普遍存在。9株CPV病毒和7株FPV株病毒均能在F81细胞上生长,产生典型的肉食兽细小病毒细胞病变。通过人工感染实验,筛选出一株强毒株,为CPV的预防提供了实验数据。序列分析表明分离的16株病毒的VP2基因全长均为1755bp,编码584个氨基酸,与国外FPV标准毒株CU-4 VP2基因大小相同;所分离的7株FPV之间核苷酸同源性为99.93%;氨基酸的同源性为99.8%,与Genbank所登录的国内外FPV的VP2基因序列比较,核苷酸同源性为99.62%,其氨基酸同源性为99.75%。对所分离的9株CPV病毒株进行序列分析,发现CPV分离株之间的核苷酸同源性为99.41%,氨基酸同源性为99.05%,与国内外CPV分离株VP2基因核苷酸同源性在99.40%-99. 44%之间,氨基酸同源性在98.99%-99.14%之间。FPV VP2基因的系统发生分析表明,FPV分离株核苷酸大多为同义突变,错义突变以散在的点突变存在;分离的FPV与中国FPV处于一支,与文献报道的遗传进化方向一致。CPV VP2基因遗传进化分析的结果显示分离的CPV株均为CPV-2a型,系统发生分析表明CPV分离株形成CPV新的分支。CPV和FPV分离株VP2的遗传进化分析为进一步对肉食兽细小病毒分型提供理论基础。本研究在分子水平上了解了我国CPV和FPV的流行及其遗传进化情况,为更有效的防治CPV和FPV提供了实验依据。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-10
前言  10-11
第一章文献综述  11-28
  综述一肉食兽细小病毒研究进展  11-23
  综述二肉食兽细小病毒遗传变异研究进展  23-28
第二章研究内容  28-52
  实验一犬科和猫科动物细小病毒的分离、鉴定  28-37
    1 材料和方法  28-32
    2 结果  32-35
      2.1 犬科动物病料样品 PCR 检测结果  32-33
      2.2 猫科病料样品 PCR 检测结果  33
      2.3 病毒分离结果  33
      2.4 病毒学鉴定结果  33-35
      2.5 人工感染易感犬试验结果  35
    3 讨论  35-36
    4 小结  36-37
  实验二犬科和猫科动物细小病毒分离株 VP2 基因的遗传进化分析及CPV 的交叉血凝抑制实验  37-52
    1 材料和方法  37-40
    2 结果  40-48
      2.1 VP2 全长基因 PCR 扩增结果  40
      2.2 重组质粒pT-VP2 的质粒 PCR 结果及酶切鉴定  40
      2.3 VP2 基因测定结果其推导的氨基酸序列分析结果  40-48
      2.4 CPV 的交叉血凝抑制试验结果  48
    3 讨论  48-51
    4 小结  51-52
结论  52-53
参考文献  53-58
致谢  58-59
作者简历  59-60
导师评阅表  60

犬科和猫科动物细小病毒分离株VP2基因的遗传进化分析研究

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