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昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化

作　者: 陈世彬
导　师: 况玲；黄俊成
学　校: 新疆农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 昆明小鼠胚胎干细胞培养基细胞因子温度氧分压
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本试验旨在研究不同的培养方法、基础培养基、细胞因子、肝素钠、温度、氧分压等因素对昆明小鼠胚胎干细胞建系的影响,筛选了昆明小鼠胚胎干细胞的最佳培养条件,并以此为基础建立了携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的小鼠胚胎干细胞系。试验利用两种不同的培养体系(KSR和N2B27)建立昆明小鼠胚胎干细胞。结果在KSR的培养体系中小鼠胚胎干细胞集落贴壁状态生长,生长较缓慢,边缘细胞分化脱落,最高传代为6代;在N2B27培养体系中细胞集落呈悬浮状态生长,生长较快,边缘光滑整齐,连续传7代未见分化。采用N2B27基本培养体系。研究不同基础培养液(高糖DMEM、knockout DMEM、DMEM/F12、TCM-199)、细胞因子(LIF、bFGF、EGF)、两种药物(SU5402、肝素钠)、温度和气相环境等因素对昆明小鼠胚胎干细胞的影响。结果表明,基础培养基knockout DMEM和DMEM/F12优于高糖DMEM和TCM-199;LIF对小鼠胚胎干细胞生长具有明显的促进作用(P<0.01);bFGF、EGF、肝素钠对小鼠胚胎干细胞有一定的促进作用(P<0.05);SU5402对小鼠胚胎干细胞没有明显的促进作用(P>0.05);温度39℃比37℃更有利于小鼠胚胎干细胞的快速增殖,氧分压20% O2较氧分压5% O2有利于小鼠胚胎干细胞的建系。以N2B27系统为条件,采用卵周隙注射携带GFP基因的慢病毒载体法感染早期小鼠胚胎,再将转染小鼠胚胎接种在N2B27胚胎干细胞培养体系,经过培养获得携带GFP转基因的昆明小鼠胚胎干细胞。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
第1章引言  7-20
  1.1 ESC 的研究现状  7-8
  1.2 KM-ESC 的研究现状  8
  1.3 ESC 的生物学特性  8-10
  1.4 影响ESC 建系的因素  10-15
  1.5 ESC 的增殖分化调控机制  15-17
  1.6 ESC 的应用前景  17-19
  1.7 研究目的、意义和内容  19-20
第2章两种不同的胚胎干细胞培养体系的比较  20-28
  2.1 材料  20-22
  2.2 方法  22-24
  2.3 结果  24-26
  2.4 讨论  26-28
第3章昆明小鼠胚胎干细胞的培养体系的优化  28-42
  3.1 培养基对KM-ESC 的影响  28-33
  3.2 温度和氧分压对KM-ESC 的影响  33-37
  3.3 药物和细胞因子对KM-ESC 的影响  37-42
第4章绿色荧光蛋白（GFP）标记的 KM-ESC 建系  42-47
  4.1 材料  42-43
  4.2 方法  43-44
  4.3 结果  44-45
  4.4 讨论  45-47
第5章全文结论  47-48
参考文献  48-56
致谢  56-57
作者简介  57

昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化

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