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外源生长素和多胺对M_（26）试管苗不定根发生效应的研究

作　者: 辛蓓
导　师: 徐继忠；孙建设
学　校: 河北农业大学
专　业: 果树学
关键词: 平果砧木M26试管苗不定根激素多胺蛋白质
分类号: S661.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

不定根（adventitious root）的形成是植物发育生物学中一个重要而基本的问题,对离体繁殖也同样具有重要意义。不定根形成经历了脱分化和再分化的过程,是通过基因调控发生的。基因功能的执行体—功能性蛋白在此过程中起着重要的作用。激素和多胺与基因选择性表达、遗传物质合成和器官分化等都有密切关系,可作为不定根形成过程的调控因素。本试验以苹果砧木M₂₆试管苗为试材,研究了外源IBA和外源Spd对M₂₆试管苗生根过程中蛋白质组成、内源激素和内源多胺动态变化的影响,主要试验结果如下: 1.M₂₆试管苗茎基部未发现潜伏根原基,不定根原基由诱生根原基发育形成,诱生根原基源于维管形成层部位细胞的分裂和分化。解剖学观察表明M₂₆试管苗诱导生根的过程可划分为:（1）细胞脱分化时期;（2）不定根原基形成时期;（3）不定根的分化形成期。 2.10^-3～10^-5mol·L^-1外源多胺处理对M₂₆试管苗生根有不同程度的促进效应,平均根量和生根率结果表明以10^-4 mol·L^-1Spd处理最优,与1/2MS+IAA1.0mg·L^-1+IBA0.3mg·L^-1生根培养效应相近。Put处理侧根长势优于Spd、Spm处理和对照,其中以1×10^-5mol·L^-1处理的侧根最为发达。 3.IBA浸泡试验表明,经100mg·L^-1IBA浸泡后再接入1/2MS+IAA1.0mg·L^-1+IBA0.3 mg·L^-1生根培养基其生根效果优于直接接入。生根指数表明,100mg·L^-1IBA浸泡24h为最佳,经此种处理的试管苗生根能力最强。 4.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现,诱导生根前后M₂₆试管苗茎基部的可溶性蛋白的表达发生了变化。生根培养后有五条蛋白条带（26.8kDa、37kDa、40.3kDa、43kDa和66kDa）减弱或消失,四条蛋白条带（38.5kDa、42kDa、53.2kDa和55.5kDa）表达丰度提高,同时明显表达了四条新的分子量分别为26kDa、27.7kDa、32.5 kDa、和45kDa的蛋白条带。生根过程中,三条蛋白条带的表达丰度随生根培养时间的延长而逐渐提高。进一步研究表明,分子量在32.5KDa和55KDa附近的蛋白条带中包括与生根相关的特异蛋白。 5.100mg·L^-1IBA浸泡M₂₆试管苗茎基部不同时间,其可溶性蛋白的表达存在差异。处理12h时,茎基部有66kDa和43kDa两条特异蛋白条带明显表达。处理16h和20h,茎基部蛋白的表达情况基本相同,且与生根培养五天时的试管苗茎基部可溶蛋白的表达情况相似,同时还有28.5kDa和27kDa小分子量蛋白表达丰度较高,与生根培养五天时的蛋白表达有区别。处理24h,42kDa蛋白带表达丰度明显降低,27kDa蛋白带表达丰度提高,同时有特异蛋白带40.3kDa和36kDa开始表达。外源Spd处理同样引起了M₂₆试管苗茎基部可溶性蛋白的变化,随处理时间的延长,有三条蛋白条带消失同时有五条新蛋白开始表达,还有蛋白条带随处理时间其丰度呈现动态变化。Spd诱导表达的42.9kDa特异蛋白条带被IBA所抑制,而IBA诱导的36.3kDa蛋白条带不能被Spd抑制。 6.100mg·L^-1IBA和10^-3mol·L^-1Spd浸泡M₂₆试管苗茎基部12小时后,接入含有1.0mg·L^-1IAA的1/2MS培养基中培养五天,SDS电泳分析发现,二者可溶性

外源生长素和多胺对M_（26）试管苗不定根发生效应的研究

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