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异硫氰酸荧光素—溶菌酶的制备及其对溶菌酶晶体生长影响的预研究

作　者: 代连花
导　师: 刘奉岭
学　校: 山东师范大学
专　业: 有机化学
关键词: 蛋白质晶体生长溶菌酶蛋白质异硫氰酸荧光素—蛋白质激光扫描共聚焦显微镜
分类号: O629
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

在以研究蛋白质这些生物大分子为主要目标时,在基础科学方面是研究蛋白质大分子晶体生长的过程,认识大分子晶体生长的物理化学,如何获得高质量的蛋白质晶体。研究蛋白质晶体的生长对生命科学和微重力科学具有重要的意义,因此蛋白质晶体生长过程越来越受到重视。在本文中主要介绍了研究蛋白质晶体生长的意义及目前研究蛋白质晶体生长的进展,即主要采用的研究手段和内容;介绍了采用共聚焦显微镜来研究蛋白质晶体生长的意义;嫁接荧光指示剂在研究蛋白质晶体生长的意义和进展,并且简要介绍了蛋白质晶体生长的物理化学过程和主要的培养方法。我们研究蛋白质经常采用荧光方法,这种方法主要利用了研究的样品具有荧光这一特性。但蛋白质本身所具有的内源荧光一般无法直接应用于蛋白质晶体生长研究中,这是因为蛋白质在结晶过程中浓度非常高,而荧光技术却要求荧光探针的浓度尽可能的低,以保持在线性反映区域内,所以在研究蛋白质晶体生长时需要引入外源性荧光物质来解决这一问题。我们用异硫氰酸荧光素作为探针标记了溶菌酶,测定了溶菌酶标记物的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱,摸索了其晶体的生长条件。实验结果表明,在标记过程中异硫氰酸荧光素没有影响溶菌酶的生化性质,标记后的溶菌酶可用于激光扫描共聚焦显微镜以便进行后续研究。同时我们以不同浓度的异硫氰酸荧光素标记的蛋白质作为杂质,研究其对不同浓度蛋白质晶体生长的影响。通过实验我们发现,加入0.09%异硫氰酸荧光素就可以抑制溶菌酶晶体{110}晶面的生长速度为85%左右。在其他浓度的溶菌酶也可得到相同的结论。这说明当杂质存在时,由于抑制了晶核的出现,使晶体尺

全文目录

摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
第一章绪论  10-17
  1.1 研究蛋白质晶体生长的意义  10-11
  1.2 蛋白质在微重力条件下生长的前景  11-12
  1.3 目前蛋白质晶体研究的进展  12-17
第二章蛋白质晶体的生长  17-32
  2.1 蛋白质晶体生长的方法  17-20
  2.2 蛋白质晶体生长的过程  20-22
  2.3 蛋白质晶体生长中的物理化学  22-26
  2.4 结晶与溶解度图的关系  26-28
  2.5 蛋白质晶体的特点和生长的主要参数  28-31
  2.6 溶菌酶的一些参数  31-32
第三章异硫氰酸荧光素-溶菌酶的制备及其在晶体生长研究中的应用  32-39
  3.1 前言  32-33
  3.2 实验方法  33-36
  3.3 结果与讨论  36-39
第四章用异硫氰酸荧光素-溶菌酶作为杂质对溶菌酶蛋白质晶体生长的影响  39-48
  4.1 前言  39-40
  4.2 实验部分  40-46
  4.3 结果与讨论  46-48
第五章激光扫描共聚焦显微镜在蛋白质晶体生长研究中的应用  48-58
  5.1 前言  48-49
  5.2 激光扫描共聚焦显微镜的原理  49-50
  5.3 激光扫描显微镜在蛋白质晶体生长研究中的应用  50-53
  5.4 实验部分  53-57
  5.5 讨论  57-58
参考文献  58-63
硕士期间所写论文  63-64
致谢  64

异硫氰酸荧光素—溶菌酶的制备及其对溶菌酶晶体生长影响的预研究

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