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浆细胞样树突状细胞在慢性乙型肝炎发病机制中的作用研究

作　者: 刘庆峰
导　师: 王福生；毛远丽
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 免疫学
关键词: 浆细胞样树突状细胞(pDCs) 乙型肝炎病毒(HBV) 免疫磁珠分选(MACS) CpG ODN IFN-α 流式细胞分析术 免疫组化技术
分类号: R512.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


目的:观察浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells, pDCs)在慢性乙型肝炎病人体内的特点,分析其与临床病程的关系,初步探讨pDCs在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染发病机制中的作用,为树突状细胞(dendritic cells, DCs)疫苗的研制提供实验依据。方法:(1)应用免疫磁珠分选技术纯化7例慢性乙型肝炎病人和4例健康人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中的pDCs,体外加入CpG ODN2216或CpG ODN2006刺激剂共培养24h后,应用流式细胞仪分析刺激前后pDCs表面共刺激分子的表达情况,同时通过ELISA检测培养上清中细胞因子IFN-α,IL-12和IL-10的产生情况,从而初步鉴定pDCs的免疫学特性。(2)应用流式细胞仪检测20例慢性乙型肝炎病人和15例健康人外周血DC亚群和淋巴细胞亚群频率,并使用CpG ODN2216刺激其PBMCs,然后利用ELISA技术检测培养上清中IFN-α含量,分析HBV慢性感染病人外周血pDCs频率、数量和功能的变化及其与临床病程的关系。(3)应用免疫组化技术和流式细胞分析技术等观察11例慢性重型乙型肝炎病人和4例健康人外周血和肝脏浸润淋巴细胞(Liver infiltrating lymphocytes, LILs)中pDCs的频率、数量和功能的差异。结果:(1)应用免疫磁珠分选技术可以得到纯度大于95%的pDCs。CpG ODN2216可以刺激纯化的pDCs产生大量的IFN-α,而CpG ODN2006刺激pDCs高表达共刺激分子CD80、CD86、CD40和CD83;与健康人比较,CpG ODN2216刺激慢性乙肝病人纯化的pDCs产生的IFN-α的能力明显降低。(2)与健康人比较,慢性乙型肝炎病人外周血中pDCs和NK细胞频率明显下降,并且CpG ODN2216刺激PBMCs产生IFN-α的能力也显著降低;相关性分析表明,慢性乙肝病人pDCs频率与ALT呈明显负相关,但与血浆病毒载量无明显相关。(3)慢性重型乙型肝炎病人LILs中pDCs百分含量明显高于PBMCs,免疫组化检测也显示慢性重型乙型肝

全文目录


缩略语索引  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分 人外周血中pDCs的鉴定  11-20
  实验材料  11-12
  实验方法  12-14
  实验结果  14-17
  讨论  17-20
第二部分 比较CpG ODN刺激慢性乙肝病人和健康人外周血单个核细胞产生IFN-α的情况  20-28
  实验材料  20-21
  实验方法  21-22
  实验结果  22-26
  讨论  26-28
第三部分 慢性重型乙型肝炎病人肝脏中pDCs的特点  28-36
  实验材料  28-30
  实验方法  30-31
  实验结果  31-33
  讨论  33-36
总结  36-37
参考文献  37-40
文献综述  40-58
在读期间发表和撰写的文章  58-59
致谢  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 传染病 > 病毒传染病 > 病毒性肝炎 > 乙型肝炎
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