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白藜芦醇对内皮细胞eNOS、Cav-1表达的影响

作　者: 张莹
导　师: 应晨江
学　校: 华中科技大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 白藜芦醇窖蛋白-1 窖蛋白-1 磷酸化 eNOS eNOS磷酸化
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的和意义:心血管疾病(cardiovascular diseases, CVD)是当今世界上威胁人类健康的最严重疾病之一,其发病率和死亡率均超过肿瘤,跃居全死因首位。流行病学调查发现长期饮用红葡萄酒者,其冠心病、高血压等心血管疾病的发病危险性明显低于一般人,并发现这与红葡萄酒中所含的植物化学物成分白藜芦醇有关。白藜芦醇作为一种天然的植物化学物,具有抗氧化、抗炎症、抗血小板聚集、抗增殖、抗肿瘤、抗心血管疾病、植物雌激素样作用以及调节免疫等多种活性作用,其在抗癌、心血管疾病中所发挥的作用尤其受到关注。有研究证明白藜芦醇可以改善内皮功能,但其中的作用机制尚不清楚。本论文探讨了白藜芦醇对eNOS、Cav-1表达的影响,初步了解白藜芦醇预防心血管疾病的机制。研究方法:以体外传代培养的牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells, BAECs)为研究对象,用浓度为0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的白藜芦醇作用BAECs 20h,采用表面等离子共振系统(SPR)分析不同浓度白藜芦醇对eNOS、p-eNOS、Cav-1、p-Cav-1表达的影响。另外,采用Western blot的方法检测细胞中Cav-1的表达水平。结果:(1)与对照相比浓度为0.01μmol/L、1μmol/L和10μmol/L的白藜芦醇使得eNOS蛋白磷酸化水平有不同程度的上升,尤以1μmol/L组的上升最为明显。而0.1μmol/L组具有上调eNOS表达的作用;各浓度组均使Cav-1蛋白表达有不同程度的下降。与对照相比0.01μmol/L和0.1μmol/L两组使得Cav-1蛋白磷酸化水平有不同程度的下降。(2)白藜芦醇可使BAECs中Cav-1的表达显著降低(p<0.05),且呈一定的浓度依赖性。其中浓度为0.1μmol/L和1μmol/L组Cav-1蛋白表达降低有统计学意义(p<0.01),且当白藜芦醇1μmol/L时,抑制作用最为明显。结论:白藜芦醇可以增加eNOS表达和磷酸化eNOS的活性。抑制Cav-1和Cav-1的磷酸化。且对于Cav-1蛋白的表达存在剂量依赖性。创新点:目前研究白藜芦醇的作用多从其抗肿瘤、抑制癌症等方面出发,而对于其改善内皮功能和预防心血管疾病的作用方面研究相对较少。且研究白藜芦醇心血管保护作用的机制多从激活eNOS酶活性角度探索。我们鉴于Cav-1在信号调控中的重要作用,着重研究了白藜芦醇对eNOS的上游调控因子Cav-1基因表达的影响,为揭示白藜芦醇改善内皮功能和预防CVD的分子机理,探讨白藜芦醇预防CVD机理研究开辟了一个新思路,具有积极的理论和现实意义,相关研究国内外未见报道。且本次实验第一次用表面等离子共振系统来分析相关蛋白表达水平,为今后研究开创了新的研究方法。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-14
第一部分  14-26
  1 材料  14-16
  2 方法  16-19
  3 结果  19-26
第二部分  26-34
  1 材料与方法  26-29
  2 Western blot 测不同组中蛋白表达的变化  29-32
  3. 结果  32-34
讨论  34-38
参考文献  38-43
综述  43-56
  参考文献  49-56
附录  56-57
致谢  57

白藜芦醇对内皮细胞eNOS、Cav-1表达的影响

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