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甜菜M14品系FIE基因的鉴定及花期表达cDNA文库的构建
作 者: 郑天然
导 师: 王桂芝
学 校: 黑龙江大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: FIE基因 非受精种子发育 无融合生殖 单体附加系 cDNA文库
分类号: S566.3
类 型: 硕士论文
年 份: 2004年
下 载: 150次
引 用: 1次
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内容摘要
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FIE基因首先在拟南芥中被分离，它控制着非受精种子的发育，可能是无融合生殖的组件之一。根据FIE的保守性，本实验运用保守序列法，尝试在甜菜M14品系中分离同源基因。根据FIE的基因序列设计PCR引物，以拟南芥总DNA为模板进行PCR扩增FIE特异性片段，并连接到pGEM-T Easy载体上转化E.coli JM109菌种。酶切鉴定及测序分析结果表明该克隆为拟南芥FIE基因特异片段，与拟南芥FIE基因比较同源性达99.8％，可以作为探针使用。以FIE特异片段为模板，用地高锌标记探针进行Southern杂交，结果表明甜菜M14品系中含有FIE的同源基因片段。以甜菜M14花蕾为材料，提取总RNA，分离mRNA，合成双链cDNA，通过RT-PCR法克隆得到了甜菜M14品系FIE基因406bp大小的特异片段。为了得到全长基因，采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。以后通过cDNA文库可直接筛选甜菜M14品系FIE等目的基因。
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全文目录
中文摘要 2-3
外文摘要 3-11
第1章 引言 11-28
1.1 植物无融合生殖研究进展 11-17
1.2 FIS基因的研究概况 17-23
1.3 cDNA文库的构建及其应用 23-25
1.4 实验目的及工作设想 25-28
第2章 材料与方法 28-48
2.1 实验材料 28-34
2.2 实验方法 34-48
第3章 结果 48-60
3.1 拟南芥FIE基因特异片段的克隆及序列测定 48-52
3.2 甜菜M14FIE基因特异片段的克隆及序列测定 52-57
3.3 甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建 57-60
第4章 讨论 60-65
4.1 PCR法制备DNA探针 60-61
4.2 RNA的提取纯化 61-62
4.3 引物的设计与合成 62-63
4.4 序列分析 63
4.5 mRNA的快速提取 63
4.6 cDNA文库技术的局限性 63-64
4.7 关于后续工作 64-65
结论 65-66
攻读硕(博)士学位期间所发表的论文 66-67
致谢 67-69
参考文献 69-74
独创性声明 74
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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 糖料作物 > 甜菜（甜萝卜）
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