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海带多糖的分离纯化及化学结构的初步研究

作　者: 张慧玲
导　师: 任秀莲
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 化学工程与技术
关键词: 海带多糖 提取 分离纯化 结构鉴定
分类号: TQ914.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 482次
引　用: 3次
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内容摘要


以海带为原料,研究了海带多糖的提取方法、纯化工艺和粗多糖的分级,确定了两种海带多糖的分子量并对其结构进行了初步研究。确定了硫酸-苯酚法测定多糖的工艺条件:吸收波长为487nm,多糖溶液为1ml,苯酚为1.2ml,硫酸为6ml,用蒸馏水定容至10ml,不需要水浴加热。根据单因素实验和L9（33）正交实验,确定了提取工艺条件:pH值为2、温度为65℃、液固比为40:1、提取时间为3h、提取次数2次,该条件下粗多糖的提取率为8.094%,并用浸提理论解释了海带多糖浸出速率的变化趋势。比较了Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶法对蛋白的脱色效果,结果表明木瓜蛋白酶法可有效脱除蛋白,该方法的工艺条件为:酶底比1.2%、pH值5.0,体系在70℃水浴中水解1.5h,蛋白的去除率为66.67%。实验发现木瓜蛋白酶脱蛋白的条件与多糖的提取条件相似,按照以上确定的方法在热水提取海带多糖的工艺条件下提取1.5h,再加木瓜蛋白酶提取1.5h,粗多糖的提取率达到13.17%,蛋白去除率为65.5%。活性炭、DA201树脂、DA202树脂和DA203树脂脱色结果表明: DA202树脂用量最小,色素去除率最高,多糖的损失率最低。DEAEC-52纤维素离子交换柱分级纯化粗多糖得到三种多糖L1、L2和L3,其中L2和L3含量高,为海带多糖的主要成分。将此两种多糖进行DEAE-SephadexA-75凝胶柱层析、紫外检测和冻融分析,证明了L2和L3为单一多糖。DEAE-SephadexA-200凝胶柱层析得到L2和L3的分子量分别为131.8kD和93.3kD。红外光谱分析表明:L2含有α、β两种糖苷键,是带有硫酸根的酸性多糖,L3是一种黏度很大的酸性多糖。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-11
第1章 绪论  11-23
  1.1 海带多糖的药理作用  12-16
    1.1.1 降血糖作用  12-13
    1.1.2 降血脂和降血压作用  13
    1.1.3 抗凝血作用  13-14
    1.1.4 抗肿瘤作用  14-15
    1.1.5 抗菌、病毒作用  15
    1.1.6 调节免疫作用  15-16
  1.2 海带多糖的提取方法研究  16-18
    1.2.1 水提取法  16
    1.2.2 酸提取法  16-17
    1.2.3 沉淀法  17
    1.2.4 复合酶法  17-18
    1.2.5 超声波辅助提取法  18
  1.3 多糖的纯化方法研究  18-21
    1.3.1 多糖的测定方法研究  18
    1.3.2 除蛋白、色素方法研究  18-19
    1.3.3 多糖的分级纯化研究  19-20
    1.3.4 多糖的相对分子量测定  20
    1.3.5 多糖的结构鉴定  20-21
  1.4 海带多糖分离提取研究的目的和意义  21-23
    1.4.1 存在问题  21
    1.4.2 本文研究内容  21-23
第2章 实验材料与方法  23-30
  2.1 实验材料、试剂及仪器  23-24
    2.1.1 实验试剂  23-24
    2.1.2 主要仪器和设备  24
  2.2 实验方法  24-30
    2.2.1 实验流程  24-25
    2.2.2 实验中所用溶液的配制  25-26
    2.2.3 测定方法  26
    2.2.4 计算方法  26-27
    2.2.5 提取方法  27
    2.2.6 纯化方法  27-30
第3章 海带多糖的提取工艺优化研究  30-41
  3.1 苯酚-硫酸法的建立  30-34
    3.1.1 吸收波长的确定  30
    3.1.2 硫酸用量对吸光度的影响  30-31
    3.1.3 苯酚用量对吸光度的影响  31-32
    3.1.4 重现性实验  32
    3.1.5 稳定性实验  32-33
    3.1.6 标准曲线的绘制  33
    3.1.7 加热时间对吸光度的影响  33-34
  3.2 海带多糖的提取实验  34-40
    3.2.1 浸出过程动力学  34-35
    3.2.2 提取过程单因素实验  35-38
    3.2.3 正交实验  38-40
  3.3 本章小结  40-41
第4章 脱除粗多糖中蛋白的研究  41-48
  4.1 sevag法  41-42
  4.2 三氯乙酸法（TCA）  42-43
  4.3 木瓜蛋白酶法  43-47
    4.3.1 酶底比对蛋白去除率的影响  43
    4.3.2 pH值对蛋白去除率的影响  43-44
    4.3.3 酶解时间对蛋白去除率的影响  44
    4.3.4 酶解温度对蛋白去除率的影响  44-45
    4.3.5 正交实验  45-47
  4.4 酶法辅助提取多糖  47
  4.5 本章小结  47-48
第5章 脱除粗多糖中色素的研究  48-66
  5.1 活性炭去色素  48-53
    5.1.1 吸附柱高径比的选择  48-49
    5.1.2 进料流速的选择  49-50
    5.1.3 料液浓度的选择  50-51
    5.1.4 pH值的选择  51-52
    5.1.5 流出曲线  52-53
  5.2 大孔树脂DA201 去色素  53-57
    5.2.1 吸附柱高径比选择  53-54
    5.2.2 进料流速选择  54
    5.2.3 料液浓度选择  54-56
    5.2.4 pH值的选择  56
    5.2.5 流出曲线  56-57
  5.3 大孔树脂DA202 去色素  57-61
    5.3.1 高径比选择  57-58
    5.3.2 进料流速选择  58-59
    5.3.3 料液浓度选择  59-60
    5.3.4 pH值的选择  60-61
    5.3.5 流出曲线  61
  5.4 大孔树脂DA203 去色素  61-65
    5.4.1 高径比选择  61-62
    5.4.2 进料流速选择  62-63
    5.4.3 料液浓度选择  63-64
    5.4.4 pH值的选择  64
    5.4.5 流出曲线  64-65
  5.5 本章小结  65-66
第6章 海带多糖的纯化及结构研究  66-71
  6.1 海带多糖的纯化  66-68
    6.1.1 DEAEC-52 纤维素离子交换柱层析  66
    6.1.2 DEAE-SephadexA-75 凝胶柱层析  66-67
    6.1.3 紫外分光光度法检测  67-68
    6.1.4 冻融分析法  68
  6.2 海带多糖的性质及结构  68-70
    6.2.1 多糖的基本物理性质  68
    6.2.2 分子量的测定  68-69
    6.2.3 分子构型分析  69-70
  6.3 本章小结  70-71
结论  71-72
参考文献  72-77
攻读学位期间发表的学术论文  77-79
致谢  79

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 其他化学工业 > 农产物化学加工工业 > 化学加工过程及设备 > 水产物化学加工
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