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CsA和TNF-α对体外培养GFs增殖和胶原代谢的影响

作　者: 韦艺
导　师: 郭新程
学　校: 中南大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 牙龈成纤维细胞 CsA TNF-α 牙龈增生
分类号: R78
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 48次
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内容摘要


目的:研究环孢霉素A（CsA）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养人牙龈成纤维细胞（GFs）增殖和胶原合成的影响。探讨牙龈炎症与药物性牙龈增生的关系及CsA所致牙龈增生的相关机理。方法:用原代培养的方法获取正常人牙龈成纤维细胞,体外培养、传代后,取生长良好的4～8代用于实验。按以下条件进行实验分组:A:空白对照组B1:10ug/L CsA,B2:50 ug/L CsA,B3:250 ug/LCsA,B4:1250 ug/L CsA,C:5ug/L TNF-α,D1:10 ug/L CsA+5ug/LTNF-α,D2:50ug/L CsA+5ug/L TNF-α,D3:250ug/LCsA+5ug/LTNF-α,D4:1250 ug/L CsA+5ug/L TNF-α。将条件培养液分别作用于牙龈成纤维细胞,培养3,5,7天后用MTT法测定细胞的增殖情况,并分别于第3,5,7天收集培养上清液,用羟脯氨酸法测定胶原合成情况。结果:原代培养成功率为80%,细胞呈梭形,排列成条索状,漩涡状。细胞经CsA和TNF-α作用后形态无明显变化。不同浓度的CsA作用于成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,A值下降,其中B1、B2、B3组与对照组无显著差别,B4组与对照组相比差异具有统计学意义。5ug/L的TNF-α作用于成纤维细胞可以刺激细胞的增殖,A值与对照组相比显著升高（P＜0.01）。CsA和TNF-α共同作用于成纤维细胞后,D1、D2、D3组A值较A组升高,但较C组降低。D4组细胞增殖显著增加,与C组相比差异具有统计学意义。不同浓度的CsA作用于成纤维细胞后,上清液中胶原含量增加,且随着浓度的升高和培养时间延长,增加越明显。5ug/L的TNF-α作用于成纤维细胞后,上清液中胶原含量降低,与对照组相比差异具有统计学意义。CsA和TNF-α共同作用于成纤维细胞时,上清液中胶原含量增加,D3、D4组分别与B3、B4组相比,差异具有统计学意义,但D1、D2与B1、B2组相比,差异没有统计学意义。结论:本实验通过体外培养人牙龈成纤维细胞,将不同浓度的CsA和TNF-α作用于细胞,观察细胞增殖和胶原合成的变化。结果表明:1.CsA对成纤维细胞的增殖没有促进作用,高浓度时抑制细胞的增殖。CsA可以刺激细胞的胶原合成,这可能是CsA引起牙龈增生的主要机制。2.高浓度CsA与TNF-α共同作用于成纤维细胞时,促进成纤维细胞的增殖。提示在一定浓度下CsA可能放大TNF-α刺激成纤维细胞增殖的效应。3.一定浓度的CsA和TNF-α共同作用于成纤维细胞时,促进胶原含量的增加。提示TNF-α可能增加了成纤维细胞对CsA的敏感性。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
第一章 引言  10-12
第二章 人牙龈成纤维细胞的体外培养及鉴定  12-15
  2.1 材料和方法  12-13
    2.1.1 实验材料  12
    2.1.2 实验方法  12-13
  2.2.结果  13-14
    2.2.1 细胞形态观察  13-14
    2.2.2 细胞生长曲线  14
  2.3.讨论  14-15
第三章 MTT法测定细胞的增殖  15-22
  3.1.材料和方法  15
    3.1.1 人牙龈成纤维细胞的培养  15
    3.1.2 主要试剂和仪器  15
  3.2.实验步骤  15-16
    3.2.1 实验分组  15-16
    3.2.2 CsA和TNF-α的配制  16
    3.2.3 成纤维细胞增殖实验  16
    3.2.4 统计学分析  16
  3.3.结果  16-17
    3.3.1 细胞形态学观察  16
    3.3.2 细胞增殖结果(见表1)  16-17
  3.4.讨论  17-22
    3.4.1 不同浓度CsA对成纤维细胞增殖的影响  17-19
    3.4.2 TNF-α对成纤维细胞增殖的影响  19-20
    3.4.3 CsA和TNF-α对牙龈成纤维细胞增殖的共同作用  20-22
第四章 羟脯氨酸测试法测定细胞胶原合成的变化  22-28
  4.1 材料和方法  22
    4.1.1 人牙龈成纤维细胞的培养  22
    4.1.2 主要试剂和仪器  22
  4.2.实验步骤  22-23
    4.2.1 实验分组  22
    4.2.2 CsA和TNF-α的配制  22
    4.2.3 羟脯氨酸法测定胶原合成  22-23
    4.2.4 统计学分析  23
  4.3 结果(见表2)  23-24
    4.3.1 不同浓度的CsA对成纤维细胞胶原合成的影响  24
    4.3.2 TNF-α对成纤维细胞胶原合成的影响  24
    4.3.3 CsA和TNF-α对成纤维细胞胶原合成的共同影响  24
  4.4.讨论  24-28
    4.4.1 不同浓度CsA对成纤维细胞胶原合成的影响  25-26
    4.4.2 TNF-α对成纤维细胞胶原合成的作用  26
    4.4.3 CsA和TNF-α对成纤维细胞胶原合成的共同影响  26-28
第五章 结论  28-29
参考文献  29-32
附图  32-35
文献综述  35-42
  1、CsA引起药物性牙龈增生的临床病理学研究  35-36
  2、CsA引起药物性牙龈增生的可能机制  36-42
    2.1 环孢霉素对成纤维细胞的直接作用  36-38
    2.2 牙龈炎症在药物性牙龈增生中的作用  38-39
    2.3 细胞凋亡在药物性牙龈增生发病机制中的意义  39-40
    2.4 细胞内钙离子浓度变化的影响  40-42
结束语  42-47
致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 口腔科学
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