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致奶牛乳房炎木糖葡萄球菌部分生物学特性及Ⅰ类整合子检测

作　者: 魏鲁予
导　师: 剡根强
学　校: 石河子大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 木糖葡萄球菌分离与鉴定 16SrRNA Ⅰ类整合子
分类号: S852.611
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究从新疆北疆地区部分奶牛场临床型奶牛乳房炎乳样中分离的65株木糖葡萄球菌,采用常规生理生化鉴定、梅里埃生化鉴定系统鉴定和木糖葡萄球菌16SrRNA分子生物学鉴定筛选出60株木糖葡萄球菌,对分离的木糖葡萄球菌进行了致病性试验,药敏试验,及木糖葡萄球菌携带的I类整合子的PCR检测,分析了木糖葡萄球菌耐药表型与所携带的I类整合子之间的相关性。结果如下：1.被测菌株血浆凝固酶均为阴性,耐热核酸酶阴性,过氧化氢酶及甘露醇发酵为阳性,8株分离菌出现β-溶血,5株对小白鼠有致病性。2.对筛选出的木糖葡萄球菌进行16SrRNA基因PCR检测,有60株扩增出与目的片段相同的片段,选取典型的片段回收测序,经测序,在NCBI中比对,同源性在98.97%以上。3.木糖葡萄球菌耐药率较高的抗生素包括磺胺嘧啶钠(100%),青霉素钾(93.3%)、庆大霉素(90%)、四环素(90%)、硫酸链霉素(86.7%),敏感度较高的为阿米卡星(6.7%)、恩诺沙星(10%)。试验菌主要对氨基糖苷类,青霉素类,四环素类,磺胺类抗生素表现耐药性。4.本研究对新疆北疆地区分离的木糖葡萄球菌I类整合酶基因及其耐药基因盒进行了检测,分析了菌株携带整合子与其耐药表型的相关性,结果发现,I类整合子阳性菌株的耐药率明显高于阴性菌株,药敏表型分析表明,I类整合子与木糖葡萄球菌的耐药性有关,即I类整合子阳性菌比I类整合子阴性菌更容易产生耐药性。通过对整合子系统的研究,可以更多的了解细菌的耐药机制。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-9
符号说明  9-10
前言  10-11
第一章文献综述  11-26
  1 凝固酶阴性葡萄球菌的研究进展  11-12
  2 木糖葡萄球菌生物学特性研究概况  12
  3 细菌鉴定研究进展  12-15
    3.1 传统的细菌学鉴定方法  12-13
    3.2 分子生物学用于细菌鉴定研究进展  13-15
    3.3 CNS耐药性研究进展  15
    3.4 CNS耐药的临床对策  15
  4 整合子研究背景  15-19
    4.1 整合子的概念  16
    4.2 整合子的基本结构  16
    4.3 Ⅰ类整合子的研究进展  16-17
    4.4 Ⅰ类整合子的基本结构  17
    4.5 Ⅱ类整合子的基本结构  17
    4.6 Ⅲ类整合子的基本结构  17-18
    4.7 革兰阳性细菌整合子的研究进展  18
    4.8 整合子耐药基因盒的研究进展  18
    4.9 整合子与耐药性的关系  18-19
  5.0 耐药基因的传播  19-20
    5.1 基因盒-整合子系统在细菌耐药传播中的作用  19
    5.2 整合子的检测  19-20
    5.3 整合子介导的多重耐药菌的治疗  20
    5.4 研究整合子的意义  20
  参考文献  20-26
第二章实验部分  26-45
  实验一致奶牛乳房炎木糖葡萄球菌部分生物学特性分析  26-31
    1 材料与方法  26-28
      1.1 材料  26-27
      1.2 方法  27-28
      1.3 木糖葡萄球菌致病性试验  28
    2 结果与分析  28-30
      2.1 染色镜检结果  28-29
      2.2 菌株的生化鉴定结果  29
      2.3 菌株血琼脂平板结果  29
      2.4 血浆凝固酶试验结果  29
      2.5 过氧化氢酶试验结果  29
      2.6 甘露醇发酵试验结果  29
      2.7 耐热核酸酶试验结果  29-30
      2.8 小白鼠感染试验结果  30
    3 讨论  30
    参考文献  30-31
  实验二木糖葡萄球菌16SrRNA基因PCR鉴定  31-37
    1 材料和方法  31-33
      1.1 菌株来源  31-32
      1.2 主要设备  32
      1.3 主要试剂  32
      1.4 基因组DNA提取  32
      1.5 16SRNA基因PCR扩增  32-33
    2 结果与分析  33-35
      2.1 PCR扩增鉴定结果  33-34
      2.2 序列测定及同源性比较结果  34-35
    3 讨论  35-36
    参考文献  36-37
  实验三致奶牛乳房炎木糖葡萄球菌中Ⅰ类整合子的检测与耐药相关性的分析  37-45
    1 材料与方法  38-41
      1.1 菌株来源  38
      1.2 主要仪器及试剂  38
      1.3 方法  38-39
      1.4 PCR检测Ⅰ类整合子  39-41
    2 结果  41-43
      2.1 木糖葡萄球菌药敏试验结果  41-42
      2.2 Ⅰ类整合子扩增结果  42-43
    3 讨论  43-44
    参考文献  44-45
结论  45
创新点  45-46
致谢  46-47
作者简介  47-48
导师评阅表  48

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