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茶花多糖的分离、纯化及其结构初步探讨

作　者: 俞兰
导　师: 魏新林；王元凤
学　校: 上海师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 茶花多糖提取纯化活性化学结构
分类号: S685.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文以茶树花(以下简称为茶花)为茶叶的替代原料提取多糖,并对茶花多糖的提取、分离、纯化、活性以及化学结构进行了研究,这对于研究茶花多糖类物质的利用有重要的科学意义,并且能够促使茶花资源得到充分利用,创造出良好的经济效益和社会效益。主要研究内容包括以下几个部分:1)对茶花中的成分进行了测定,包括脂肪、总糖、黄酮、多酚、蛋白质等活性组分,其中总糖、糖醛酸、多酚、黄酮含量较高,分别为31.82 %、7.42 %、11.67 %、10.66 %,与茶叶组分类似,故本课题以茶花为原料提取茶花中的多糖,并对茶花多糖做了一定的研究。2)分别探讨了分级、分步醇沉对茶花多糖提取的影响,结果显示当醇沉浓度为30 %时,醇沉出的茶花多糖占茶花总糖的85 %,说明以醇沉浓度为30 %时醇沉,可醇沉出大部分茶花多糖,与平时采用醇沉浓度70 %醇沉多糖溶液相比,大大减少了乙醇的用量。3)研究了不同提取工艺对茶花多糖的组成及活性的影响,包括温水提、沸水提、酶提工艺。三种提取工艺相比,酶提、沸水提多糖得率相当,约是温水提多糖得率的五倍;酸性糖、中性糖含量,三种提取工艺相差不大;α-葡萄糖苷酶活性抑制实验结果显示:沸水提多糖与温水提多糖抑制率相对较高,分别为79.15 %、64.62 %,酶提抑制率较小,仅为16.25 %(P<0.05);DPPH分光光度法以及亚油酸体系法对茶花多糖抗氧化活性实验结果显示茶花多糖具有较好的抗氧化作用;沸水提取的茶花多糖浓度为3.0μg/ml时(P<0.01),对淋巴细胞生长具有较强的促进作用。综合考虑应选用沸水提取茶花多糖。4)采用大孔树脂吸附法、阴离子交换、凝胶层析法对茶花多糖进行分离、纯化,得到了两种均一茶花多糖TFPS1、TFPS2-2。5)利用气相色谱、高效凝胶渗透色谱、离子色谱、红外光谱、1H NMR和13C NMR谱等技术手段对分离得到的TFPS1、TFPS2-2的化学结构进行了初步研究,并利用原子力显微镜观察了TFPS1、TFPS2-2的外观形貌。TFPS1是一种含有蛋白质的糖缀合物,分子量约500 kDa,共含9种氨基酸,分别为丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸、颉氨酸、丝氨酸、组氨酸、谷氨酸、天氨酸及酪氨酸,总含量约为2.03%。TFPS1由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1.0:2.9:0.5:1.3:3.3,单糖残基为α-和β-两种糖苷键类型相连接。其糖链主链可能由Glc、Gal组成,而支链可能由Ara、Gal及少量的Rha组成;TFPS2-2是一种酸性多糖,分子量为200 kDa,由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸组成,其摩尔比为1.60:4.40:6.94:1.00:13.83。TFPS2-2糖链主链可能由GalA及Gal组成,而支链可能由Rha、Ara、Glc及Gal组成。红外光谱显示含有D-葡萄吡喃糖环和β-D-阿拉伯吡喃糖;TFPS1与TFPS2-2在原子力显微镜下观察显示为均匀球状颗粒,直径分别为50~70 nm、80~100 nm。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-12
第一章绪论  12-23
  1 茶花的研究现状  12-15
    1.1 茶花资源的分布情况  12-13
    1.2 茶花的应用  13-14
    1.3 茶花中生物成分的研究概况  14-15
  2 茶多糖的研究现状  15-21
    2.1 茶花多糖的研究进展  15-16
    2.2 茶叶多糖的研究进展  16-21
  3 本文的内容、目的及意义  21-23
第二章茶花多糖提取工艺的研究  23-43
  1 材料与方法  23-30
    1.1 实验材料与设备  23-24
    1.2 实验方法  24-30
  2 结果与分析  30-42
    2.1 茶花中化学成分的分析  30-32
    2.2 醇沉工艺对茶花多糖的影响  32-35
    2.3 不同提取工艺对茶花多糖的影响  35-42
  3 结论  42-43
第三章茶花多糖的分离、纯化及其纯度鉴定  43-51
  1 材料与方法  43-46
    1.1 实验材料与设备  43-44
    1.2 实验方法  44-46
  2 结果与分析  46-50
    2.1 茶花多糖的提取、分离  46
    2.2 茶花粗多糖的纯化  46-48
    2.3 TFPS1、TFPS2-2 分子量及其纯度的鉴定  48-50
  3 结论  50-51
第四章茶花多糖的化学组成及其结构初步探讨  51-65
  1 材料与方法  51-55
    1.1 实验材料与设备  51-52
    1.2 实验方法  52-55
  2 结果与分析  55-63
    2.1 TFPS1、TFPS2-2 红外光谱分析  55-57
    2.2 TFPS1 中氨基酸组成的分析  57
    2.3 气相色谱测TFPS1 的单糖组成  57-59
    2.4 离子色谱法测定含有糖醛酸的多糖的单糖组成  59-60
    2.5 部分酸水解  60-61
    2.6 原子力显微镜对TFPS1、TFPS2-2 外观形貌的观察  61-62
    2.7 TFPS1 的核磁共振分析  62-63
  3 结论  63-65
结论  65-67
致谢  67-68
参考文献  68-74
攻读硕士学位期间的研究成果  74

茶花多糖的分离、纯化及其结构初步探讨

内容摘要

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