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动物性食品中四种致病菌多重PCR快速检测方法研究

作　者: 郭洪波
导　师: 邓景致
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 食品科学
关键词: 多重PCR 食源性致病菌通用前增菌
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

细菌性食物中毒占我国食物中毒总数的首位,动物性食品是引起细菌性食物中毒的主要原因。目前对食品中致病菌检测的方法以微生物常规培养法为主,需要3~7天,操作繁琐,所用试剂复杂多样,费用很高,不能满足实际商品流通需要。PCR(聚合酶链式反应)技术具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速的特点,使用PCR技术检测食品中致病菌的研究方兴未艾。大肠埃希氏菌O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和荧光假单胞菌是污染动物性食品的四种重要的致病菌。本研究结合通用前增菌技术研究,建立了一种多重PCR检测新方法,可以在LB培养基通用增菌后的6h内一步同时检测食品中污染的这四种致病菌。该方法具有特异性良好、简便快速、经济实用的优点。研究结果如下:(1)对大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌、伤寒沙门氏菌、宋氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、创伤弧菌、单增李氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等九种食源性致病菌进行通用前增菌方法研究,实验表明,在LB肉汤培养基36℃培养18 h,增菌效果最好,且增菌数量级均衡一致,达108 cfu/mL。(2) LB、NB和UPB培养基中30℃、33℃、36℃培养12h,大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌、伤寒沙门氏菌、宋氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、创伤弧菌、单增李氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等九种菌增菌数量级达到106以上,也能够满足PCR等检测方法的需要。但这几种培养基在36℃的培养时间应选在12~18 h左右,不宜超过18 h。(3)根据大肠埃希氏菌O157:H7的eaeA基因,单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因,小肠结肠炎耶尔森氏菌的ail基因,荧光假单胞菌的htpX基因设计了4对引物。实验证实具有良好的特异性。(4)建立了大肠埃希氏菌O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和荧光假单胞菌的单重和多重PCR检测方法,并确定了多重PCR体系和热循环参数。经实验证实了所建立的方法特异性很强。

动物性食品中四种致病菌多重PCR快速检测方法研究

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