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南蛇藤总萜诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成的实验研究

作　者: 杨庆伟
导　师: 刘延庆
学　校: 扬州大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 南蛇藤 鼠黑色素瘤B16BL6细胞 人肝癌7721细胞 肿瘤血管生成
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:1.研究南蛇藤总萜体外抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,以及对其细胞凋亡的影响,为南蛇藤总萜对黑色素瘤抗瘤活性方面的研究奠定初步基础。2.探讨南蛇藤总萜对人肝癌7721细胞增殖的影响,在非细胞毒浓度下研究南蛇藤总萜对人肝癌7721细胞同质粘附和异质粘附的影响,进一步研究南蛇藤总萜抑制肿瘤粘附、侵袭和转移的机制。3.研究南蛇藤总萜对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vain endothelial cells,HUVECs)增殖和凋亡的影响,探讨其抑制肿瘤血管生成的可能机制。方法:1. MTT法检测南蛇藤总萜对鼠黑色素瘤B16BL6细胞、人肝癌7721细胞和HUVECs增殖的影响。2.流式细胞仪法检测南蛇藤总萜对鼠黑色素瘤B16BL6细胞和HUVECs凋亡的影响。3.通过酶标仪测定吸光度(OD值)的变化,检测肿瘤细胞间的粘附能力,检测肿瘤细胞与细胞外基质的粘附能力,检测肿瘤细胞与HUVECs的粘附能力。4.采用流式细胞术,通过间接荧光标记法测定人肝癌细胞MMP-2蛋白和人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白的变化。5. ELISA法检测血管内皮生长因子(vascular endothetial growth factor,VEGF)含量的变化。结果:1. MTT结果显示,不同浓度南蛇藤总萜能够抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞、人肝癌7721细胞和HUVECs增殖,存在量效关系。2.流式细胞仪法检测结果显示,南蛇藤总萜能够诱导鼠黑色素瘤B16BL6细胞和HUVECs凋亡,存在时间依赖性和剂量依赖性。3.选取其非细胞毒浓度进行肿瘤粘附、侵袭和转移的相关试验。试验数据显示,不同浓度的南蛇藤总萜可以促进肝癌7721细胞间的同质黏附。4.试验数据显示,南蛇藤总萜能明显抑制肝癌7721细胞侵袭基底膜成份Matrigel的能力,其黏附抑制率与药物剂量呈正相关。5.试验数据显示,南蛇藤总萜能明显抑制肝癌7721细胞与血管内皮细胞的黏附能力,其黏附抑制率与药物剂量呈一定相关性。6.流式细胞仪结果分析表明,南蛇藤总萜能够下调MMP-2蛋白的表达,与对照组相比,存在差异性(P<0.05)。当药物浓度不断增大时,其FI值逐步下降,与药物剂量呈一定的相关性。7.结果显示,不同浓度的南蛇藤总萜能够下调Bcl-2蛋白的表达,与血管内皮细胞凋亡存在一定的相关性。8. ELISA结果显示,南蛇藤总萜能够明显降低细胞因子VEGF的含量,与对照组相比,存在显著性差异(P<0.05)。随着药物浓度的增加,细胞因子VEGF的含量在逐步的减少,与药物的剂量存在一定的量效关系。结论:1.南蛇藤总萜体外能够抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,(并)诱导其细胞凋亡,对黑色素瘤表现出很强的抗瘤活性,值得深入研究。2.南蛇藤总萜能够促进肿瘤细胞的同质粘附,抑制肿瘤细胞的异质粘附,在肿瘤的粘附、侵袭和血管生成方面表现出很好的活性,其机制可能与下调MMP-2和VEGF的表达有一定的相关性。3.南蛇藤总萜能够抑制HUVECs增殖并能诱导其凋亡,这与下调癌基因蛋白Bcl-2可能存在一定的相关性。4.本研究发现,南蛇藤抗肿瘤活性成份目前主要为南蛇藤总萜,在抑制肿瘤粘附、侵袭和肿瘤血管生成方面,表现出很好的活性,可能与“P53- VEGF-VEGFR”通路有一定的相关性,其机制值得更进一步深入研究。南蛇藤总萜极有希望开发成为具有我国自主知识产权的一种理想抗肿瘤血管生成靶向治疗药物。

全文目录


中文摘要  3-6
英文摘要  6-10
符号说明  10-11
前言  11-14
第一部分 南蛇藤总萜对鼠黑色素瘤B16BL6 细胞增殖和凋亡的影响  14-20
  1 材料与方法  14-16
  2 结果  16-20
第二部分 南蛇藤总萜对肿瘤细胞粘附、侵袭和转移的实验研究  20-30
  1 材料和方法  20-24
  2 结果  24-30
第三部分 南蛇藤总萜对HUVECs 增殖和凋亡的影响  30-36
  1 材料和方法  30-32
  2 试验结果与分析  32-36
第四部分 讨论与结论  36-44
  1 讨论一  37-38
  2 讨论二  38-42
  3 结论  42-44
参考文献  44-47
综述  47-55
附录  55-57
致谢  57-58
攻读学位期间主要研究成果  58

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