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1研究背景及目的骨质疏松症是以骨量减少,骨组织显微结构退化为特征并导致骨脆性增加,易于骨折的一种全身性的骨代谢疾病。健康的年轻人群中,骨重建单元的骨转换率保持恒定,形成平衡,即破骨细胞的骨吸收作用与成骨细胞的骨形成作用几乎相等。如果破骨细胞骨吸收作用强于成骨细胞的骨形成作用,将使骨代谢呈负平衡状态,导致骨量降低,骨组织微结构退变,形成骨质疏松。妇女绝经后因卵巢功能下降、雌激素不足、骨丢失增加而引起的骨质疏松称为绝经后骨质疏松症。由于妇女的骨峰值较男性低,同时妇女在绝经后骨丢明显加速,停经15-20年的妇女有可能丢失其全身骨骼总量的30%,因此绝经妇女容易患骨质疏松症。研制一种治疗绝经后骨质疏松症的新药,该药物由四种成分组成,碳酸钙,维生素D3,大豆异黄酮,阿仑膦酸钠等。碳酸钙补充钙量,调节骨代谢,促进骨形成;维生素3能促进肠道对钙的吸收以及肾脏对钙的重吸收,抑制骨吸收,促进骨细胞分化而增加骨量;大豆异黄酮是植物雌激素,具有改善妇女更年期综合症状,抑制妇女绝经后骨量快速丢失的作用;阿仑膦酸钠有抑制骨吸收,增加骨量,降低骨折率并缓解骨痛,而且能提高骨密度外,还有增加骨矿物质含量的作用。四种主要成分分别作用于引起绝经后妇女骨质疏松的不同环节,将四种治疗骨质疏松的成分制成复方片剂,有效治疗绝经后妇女骨质疏松症,方便患者服用,增加患者服用的顺应性。通过大鼠去卵巢骨质疏松模型的建立,观察单纯钙剂（含维生素D3）、钙剂加大豆异黄酮、钙剂加大豆异黄酮及阿仑膦酸钠等几种给药方式对骨质疏松模型的影响,探讨复方制剂的药效。2方法2.1复方多维骨松片的制备及含量测定采用打粉,压片等方法制备了含有4种有效成分的复方骨松片。通过与标准品比较,采用高效液相仪色谱仪测定维生素D3、大豆异黄酮含量,采用分光光度比色法测定阿仑膦酸钠含量。并测试最终产品的硬度,脆性,崩解性,质量均一性等指标,控制产品质量使其达到临床使用标准。2.2复方多维骨松片的药效学研究40只SD雌性成年大鼠,随机分为5组:假手术组,去卵巢组,去卵巢（给维生素D3+碳酸钙即A组）,去卵巢（给维生素D3+碳酸钙组+大豆异黄酮即B组）,去卵巢（给维生素D3+碳酸钙组+大豆异黄酮组+阿仑膦酸盐即C组）。假手术组模拟手术过程,但不切除卵巢。去卵巢组将双侧卵巢完全切除。手术后第3周开始给药,喂养2月后将动物处死,采血,测量Ca、血清碱性磷酸酶（ALP）等生化指标。取左侧股骨,测量股骨骨密度（BMD）。将股骨固定,脱钙,包埋,切片后,HE染色,观察骨切片病理改变。分析各药物组方对大鼠骨质疏松的影响。2.3统计学方法本论文中的所有数据均采用SPSS 10.0进行分析。多组间比较采用单向方差分析（One-way ANOVA）,各组均数的多重比较采用最小显著差值法（leastsignificant different,LSD）;不满足方差齐性要求是,采用Dunnett’s T3法。3结果3.1制剂制备结果本实验采用打粉,压片等方法成功制备了含有4种有效成分的复方多维骨松片。大豆异黄酮、阿仑膦酸钠、碳酸钙、维生素D3按等量递加法过筛混合,加入粘合剂制软材,干颗粒过筛后,用旋转压片机压片成型。整个工艺按照标准流程操作,采用过程质量控制获得最终产品。将产品进行物性质量检测和有效成分测定,对其进行质量评估。通过质量检测,药片硬度适中,色泽均匀,外观光洁,质地均一,脆性,崩解性等物性指标均达到临床用药标准。进一步的药物活性成分检测表明,复方药片的大豆异黄酮,阿仑膦酸盐,维生素D3等活性成分的含量均达到标准。3.2药效学实验结果3.2.1血清生化指标各组大鼠股骨生化指标Ca和ALP测定结果:ALP含量,与空白对照组相比,除了A组无显著性差异外（P＞0.05）,其他各组均有显著性差异（P＜0.01）;和去卵巢组相比,给药的A,B,C,三组均有显著差异（P＜0.01）;B,C组和A组比较有显著差异（P＜0.01）,而B,C组之间无显著差异（P＞0.05）。Ca含量,与空白对照组相比,除了A组无显著性差异外（P＞0.05）,其他各组均有显著性差异（P＜0.05）;和去卵巢组相比,给药的A,B,C,三组均有显著差异（P＜0.01）;B组和A组比较有显著差异（P＜0.05）,而B,C组之间无显著差异（P＞0.05）。结果表明:与正常对照组相比,大鼠去卵巢后,血Ca水平下降。血液ALP水平升高,表明骨代谢增强,骨转化速率加快。与去卵巢组比较,三个给药组都有疗效,而B,C组疗效较高。3.2.2大鼠股骨骨干密度各组大鼠股骨骨密度测量结果（表3-3）:与空白对照组相比,除了A组无显著性差异外（P＞0.05）,其他各组均有显著性差异（P＜0.05）;和去卵巢组相比,给药的A,B,C,三组均有显著差异（P＜0.05）;B,C组和A组比较有显著差异（P＜0.05）,而B,C组之间无显著差异（P＞0.05）。结果表明:与假手术组相比,大鼠去卵巢后,其骨组织的骨密度下降。三个给药组与去卵巢模型组比较骨密度均有所升高。其中A组骨密度水平和假手术组相当,而B,C组骨密度水平甚至高过假手术组,表明B,C组疗效高于A组。3.2.3大鼠股骨头病理观察及测量结果病理切片观察发现,假手术组的大鼠骨小梁厚度均匀,结构清晰。去卵巢组大鼠骨小梁稀松,骨细胞数量减少,小梁间隔明显宽大。给药组A小梁厚度有所增加,但与假手术组比较仍显稀薄。给药组B大鼠骨小梁厚度明显增加,骨细胞数量增加,小梁间隔变小,骨质改善。给药C组与给药B组显微形态类似。4结论4.1通过本实验。我们初步成功制备了质地均一,硬度、崩解度、脆性等理化指标复合临床应用要求的复方多维骨松片。其中的大豆异黄酮,阿仑膦酸盐,维生素D3等活性成分的含量均达到标准。4.2单纯补充钙剂治疗绝经后骨质疏松症难以获得理想效果;4.3将钙剂与大豆异黄酮组成复方制剂,可以达到“细胞补钙”的效果,较好的发挥骨质疏松的防治效果。4.4将钙剂+大豆异黄酮-阿仑膦酸盐组成复方制剂是一种较好的理论设想,但由于药物之间的相互作用可能会影响其真正疗效。解决的办法可能是进一步改进制药工艺,制备成夹心可控释放片剂,让几种成分在消化道的不同部位崩解释放,从而减低其吸收过程的相互干扰,真正最大限度的发挥其药效的协同功能。相信这一新药的开发一定具有美好的前景。
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