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石家庄地区奶牛乳房炎流行病学调查及相关研究

作　者: 刘磊
导　师: 赵宝华
学　校: 河北师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 乳房炎病原菌多重PCR 药物敏感性试验 CMT 关键点控制奶牛乳房炎 SDS-PAGE
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

为了查清石家庄地区奶牛乳房炎中致病菌的感染几率,在应用国际通用的CMT进行奶牛全群试验后,将奶牛进行分群,确定健康牛、隐性乳房炎感染牛、临床性乳房炎感染牛。进一步采取乳池奶,应用传统的方法分离鉴定所采集的奶样中的病原菌。从石家庄地区（新华区、鹿泉、灵寿、新乐、行唐、平山、深泽等地）共采集奶样206份,分离纯化出172株细菌,经鉴定,其中葡萄球菌27.91%（48/172）、链球菌11.63%（20/172）、肠杆菌58.14%（100/172）是主要致病菌。在检出菌的奶牛中,21%的奶牛分离出一种细菌,79%的奶牛分离出两种或两种以上的细菌,被检的隐性乳房炎奶牛的主要病原菌是葡萄球菌、无乳链球菌和肠杆菌。选取8株大肠杆菌、10株链球菌和16株葡萄球菌进行了药敏试验、溶血性试验。结果表明,三种主要细菌对多种抗生素产生了耐药性,只对环丙沙星、氟哌酸、庆大霉素、丁氨卡那霉素等较敏感;葡萄球菌溶血能力较强,另两种细菌溶血能力弱或不溶血,说明葡萄球菌在奶牛乳房炎的患病过程中,致病力较强。采集92份隐性乳房炎的奶样,分别应用常规法和基因扩增法进行致病菌的检测,常规细菌鉴定法检测出金黄色葡萄球菌感染样58份,无乳链球菌感染样16份,大肠杆菌感染样46份。采用多重PCR从基因水平上对受感染奶样进行了检测,结果对70份临床疑似奶牛乳房炎感染样本进行检测,建立的PCR方法检测阳性样品数为58份,阳性检出率为82.5%:传统生化方法检测阳性样品数为53份,阳性检出率为75.5%,二者的阳性符合率为92%,表明本实验建立了快速且特异性强的多重PCR检测方法。通过对奶牛乳房炎的三种主要致病菌金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌进行超微粉中草药组方体外药敏试验,试验测定其最小抑菌浓度。结果表明,细胞破壁中草药组方对大肠杆菌的抑菌作用较好,其最小抑菌浓度（MIC）为125mg/ml,对金黄色葡萄球菌作用稍差,其MIC为250mg/ml,而对无乳链球菌作用最差,MIC在1000mg/ml以上。但总体效果较好。在前期实验的基础上,选用化学实验室合成的稀土配合物Eu（α-NMA）₃ phen·H₂O检测了对分离菌株抑菌作用,进而验证Eu萘甲酸的抑茵特性。用琼脂扩散法和滤纸片法（直径为0.5cm）测定配合物对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、致病酵母的抑制作用,采用SDS-PAGE技术观察配合物对大肠埃希氏菌蛋白的作用情况。并比较配体phen,稀土Eu离子和配合物对大肠埃希氏菌菌体蛋白及膜蛋白的作用。结果表明Eu和配体配合形成的配合物具有了新的特性,配合物对细菌的膜蛋白没有明显影响。然而Eu萘甲酸具有广谱抑菌性,并对大肠杆菌蛋白产生了较大的影响。此外,针对石家庄市奶牛乳房炎的发病情况,结合生产和实验结果,提出了控制以下关键点的技术措施:①严格控制饲养环境中的病原体:②防止挤奶后乳头的污染;③科学合理使用挤奶器以减少乳房炎的发病几率;④控制由于牛感染造成的疾病传播;⑤防止干乳期乳房的感染;⑥通过接种疫苗增强机体抗感染能力;⑦设计合理的奶牛卧床,减少病原微生物直接侵入乳房;⑧定期检查牛群,时时监控,建立合理强制性监管机制。⑨建议使用中药超微粉防治奶牛乳房炎。

全文目录

摘要  4-6
英文摘要  6-11
引言  11-13
1 文献综述  13-19
  1.1 引起乳房炎的致病菌  13-14
  1.2 乳房的防御能力  14
  1.3 乳房炎的发病规律  14
  1.4 发房炎的症状  14-15
  1.5 乳房炎引起的乳腺的组织化学及乳汁成分的变化  15-16
    1.5.1 组织化学变化  15-16
    1.5.2 乳汁成分的变化  16
  1.6 乳房炎的诊断研究现状  16
  1.7 乳房炎的预防措施的研究进展  16-17
    1.7.1 搞好挤奶卫生  16
    1.7.2 改善挤奶技术和设备  16-17
    1.7.3 增强乳房特异性抵抗力  17
    1.7.4 微量元素可预防奶牛的乳房炎  17
  1.8 乳房炎治疗的研究进程  17-19
    1.8.1 西药治疗  17-18
    1.8.2 中药治疗  18
    1.8.3 防治乳房炎的不同疗法  18-19
2 奶牛乳房炎的流行病学调查  19-23
  2.1 材料与方法  19-20
    2.1.1 调查奶牛及其试剂  19
    2.1.2 检测方法  19
    2.1.3 统计方法  19-20
  2.2 结果  20-22
    2.2.1 奶牛急性乳房炎的发病情况  20
    2.2.2 不同乳区奶牛急性乳房炎的发病率  20-21
    2.2.3 隐性乳房炎的发病情况  21
    2.2.4 奶牛不同乳区隐性乳房炎的发病率  21
    2.2.5 新乐市某奶牛场不同胎次隐性乳房炎的发病情况统计  21-22
  2.3 小结  22-23
3 奶牛隐性乳房炎病原菌的分离与鉴定  23-32
  3.1 材料与方法  23-26
    3.1.1 被检奶牛  23
    3.1.2 材料  23
    3.1.3 细菌分离与培养  23-24
    3.1.4 药敏试验  24-25
    3.1.5 扫描电镜观察  25-26
  3.2 结果  26-30
    3.2.1 细菌的生化鉴定结果  26-27
    3.2.2 奶牛乳房炎病原菌检出率分析  27
    3.2.3 奶牛乳房炎各乳区细菌的检出数的分析  27-28
    3.2.4 分离菌的药敏结果  28-29
    3.2.5 奶牛乳房炎主要病原菌的生化鉴定结果及扫描电镜观察  29-30
  3.3 小结  30-32
4 奶牛隐性乳房炎的主要病原菌的快速检测方法的建立  32-39
  4.1 材料和方法  32-35
    4.1.1 材料  32-33
    4.1.2 方法  33-35
  4.2 实验结果:  35-38
    4.2.1 无乳链球菌、沙门氏菌和酵母菌最佳退火温度筛选的结果  35-37
    4.2.2 多重PCR最佳反应条件的确定  37-38
    4.2.3 应用结果  38
  4.3 小结  38-39
5 奶牛乳房炎治疗的研究  39-56
  5.1 新型乳康的杀菌实验  39-44
    5.1.1 材料和方法  39-41
    5.1.2 结果  41-43
    5.1.3 小结  43-44
  5.2 Eu萘甲酸稀土配合物对大肠杆菌的抑菌作用  44-50
    5.2.1 材料和方法  45-46
    5.2.2 结果和分析  46-50
    5.2.3 小结  50
  5.3 针对感染机制奶牛乳房炎防治技术的关键控制点(HACCP)  50-56
    5.3.1 饲养环境中对病原菌感染的控制  51-52
    5.3.2 由感染牛造成传播疾病的控制  52-53
    5.3.3 挤奶器科学合理的使用减少乳房炎的发病几率  53-54
    5.3.4 挤奶后防止乳头的污染  54
    5.3.5 免疫接种增强机体抗感染能力  54
    5.3.6 干乳期防治乳房的感染  54-55
    5.3.7 设计合理的奶牛卧床,减少病原微生物侵入乳房  55-56
讨论  56-58
结论  58-60
参考文献  60-67
后记(含致谢)  67-68
附录  68-75
  一、英文缩略词  68-69
  二、HACCP简介  69-75
攻读学位期间取得的科研成果清单  75

石家庄地区奶牛乳房炎流行病学调查及相关研究

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