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喹诺酮类药物的荧光分析及黄酮化合物与蛋白质相互作用的研究

作　者: 张志恒
导　师: 王志
学　校: 河北农业大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 荧光光谱紫外吸收光谱喹诺酮类药物铽离子木犀草素染料木素人血清白蛋白
分类号: O657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

荧光分析法具有灵敏度高、选择性好等优点,本文采用荧光光谱法建立了喹诺酮类药物的荧光分析新方法,并研究了中草药中黄酮类化合物染料木素、木犀草素与人血清白蛋白的相互作用。在系统查阅有关文献资料的基础上,进行了以下研究工作:(1)以稀土离子铽为荧光探针,建立了简单、灵敏的测定痕量诺氟沙星的荧光分析新方法。对测定条件进行了优化:在pH = 6.0的六次甲基四胺-盐酸缓冲液中能量转移最好;[Tb3+]/[Norfloxacin]达到40000:1时,Tb3+在488 nm处的相对荧光强度达到最大。这种方法检出限低于直接荧光法十多倍;并测定了胶囊中诺氟沙星的含量,回收率为90.6%,并对反应机理进行了探讨。(2)以稀土离子铽为荧光探针,对左氧氟沙星-Tb3+体系的反应条件进行了优化,建立了左氧氟沙星-Tb3+体系测定左氧氟沙星的新方法。方法线性范围为1.0×10-8-5.0×10-6 mol·L-1,检出限为4.5×10-9 mol·L-1。测定了胶囊和注射液中药物含量,回收率较高。对反应机理进行了探讨,左氧氟沙星-Tb3+络合物可使稀土离子Tb3+的L-M型特征荧光增敏,将左氧氟沙星宽带、短波长荧光峰转化为Tb3+锐线、长波长荧光峰,从而可能避免蛋白质等物质的干扰而对复杂生物样品中的药物进行测定。(3)用荧光光谱、同步荧光光谱和紫外吸收光谱方法,研究了木犀草素与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。研究表明木犀草素对HSA有较强的荧光猝灭作用,根据不同温度下木犀草素对HSA的荧光猝灭作用,利用Stern-Volmer方程处理实验数据,结果表明木犀草素对HSA的荧光猝灭作用属于静态猝灭。根据F?rster非辐射能量转移理论计算了木犀草素与HSA间的结合常数和结合位点数,确定了木犀草素与HSA之间主要靠疏水作用力结合;求得了木犀草素与HSA间的结合距离r,热力学数据表明二者主要靠疏水作用力结合,同时用同步荧光光谱探讨了木犀草素对HSA构象的影响。(4)用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱和紫外-可见吸收光谱,研究了染料木素与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。结果表明染料木素对HSA的荧光猝灭作用属于二者形成复合物所引起的静态猝灭;利用Stern-Volmer方程处理实验数据,得到染料木素与HSA之间的结合常数KA为1.00×106(27℃)、1.66×106(37℃)和5.25×106(47℃)。根据F?rster非辐射能量转移理论,求出了染料木素与HSA之间的结合距离为2.59 nm(27℃)、2.65 nm(37℃)和2.90 nm(47℃)。通过计算热力学参数,可知该药物与人血清白蛋白的相互作用是一个吉布斯自由能降低的自发过程,且二者之间的主要作用力类型为静电引力,同时用同步荧光光谱探讨了染料木素对HSA构象的影响。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
1 引言  11-20
  1.1 药物荧光分析方法研究进展  11-16
    1.1.1 胶束增溶增敏荧光法  12
    1.1.2 同步-导数荧光光谱法  12-13
    1.1.3 荧光猝灭法  13
    1.1.4 催化荧光动力学分析法  13
    1.1.5 三维荧光法  13-14
    1.1.6 稀土荧光探针技术  14-16
  1.2 药物与生物大分子相互作用研究进展  16-19
  1.3 本研究的意义和目标  19-20
2 以铽离子为荧光探针测定诺氟沙星的含量  20-26
  2.1 试验部分  20-21
    2.1.1 主要仪器与试剂  20-21
    2.1.2 试验方法  21
  2.2 结果与讨论  21-24
    2.2.1 激发和发射光谱  21-22
    2.2.2 酸度对体系的影响  22-23
    2.2.3 Tb~(3+)浓度的影响  23-24
    2.2.4 反应时间和络合物的稳定性  24
  2.3 样品分析  24
    2.3.1 标准曲线与检测限  24
    2.3.2 样品含量及其回收率的测定  24
  2.4 机理探讨  24-25
  2.5 结论  25-26
3 以铽离子为荧光探针测定左氧氟沙星的含量  26-31
  3.1 试验部分  26-27
    3.1.1 主要仪器与试剂  26
    3.1.2 试验方法  26-27
  3.2 结果与讨论  27-29
    3.2.1 激发和发射光谱  27-28
    3.2.2 酸度对体系的影响  28-29
    3.2.3 Tb~(3+)浓度的影响  29
    3.2.4 反应时间和络合物的稳定性  29
  3.3 样品分析  29-30
    3.3.1 标准曲线与检测限  29-30
    3.3.2 样品含量及其回收率的测定  30
  3.4 机理探讨  30
  3.5 结论  30-31
4 荧光法研究木犀草素与人血清白蛋白的相互作用  31-39
  4.1 试验部分  31-32
    4.1.1 仪器与试剂  31-32
    4.1.2 试验方法  32
  4.2 结果与讨论  32-38
    4.2.1 荧光猝灭光谱  32-33
    4.2.2 荧光猝灭机理  33-34
    4.2.3 木犀草素与HSA 的表观结合常数K_A 以及结合位点数n  34-35
    4.2.4 木犀草素与HSA 之间作用力的类型  35-36
    4.2.5 木犀草素与HSA 的结合距离  36-37
    4.2.6 木犀草素与HSA 结合的同步荧光光谱  37-38
  4.3 结论  38-39
5 利用光谱法研究染料木素与人血清白蛋白的相互作用  39-46
  5.1 试验部分  39-40
    5.1.1 仪器与试剂  39
    5.1.2 试验方法  39-40
  5.2 结果与讨论  40-45
    5.2.1 荧光猝灭光谱  40
    5.2.2 荧光猝灭机理  40-41
    5.2.3 染料木素与HSA 的表观结合常数K_A 以及结合位点数n  41-42
    5.2.4 染料木素与HSA 的结合距离  42-43
    5.2.5 染料木素与HSA 之间的作用力类型  43-44
    5.2.6 同步荧光光谱  44-45
  5.3 结论  45-46
6 结论  46-47
参考文献  47-54
在读期间发表论文  54-55
作者简历  55-56
致谢  56

喹诺酮类药物的荧光分析及黄酮化合物与蛋白质相互作用的研究

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