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鱼腥藻PCC7120 all0012基因的初步研究

作　者: 张寅静
导　师: 陈思礼
学　校: 中南民族大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 鱼腥藻PCC7120 cpcM 缺失突变体 强光光敏性
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目前,水华现象在世界范围内普遍发生,已经影响到了人们正常的生活、生产活动。水华是由于富营养化的湖水中蓝藻疯长引起,在做好水污染治理的同时,研究怎样抑制蓝藻的生长繁殖,已成为水华防治的主要方向。Shen等在聚球藻Synechococcus sp. strain PCC 7002和集胞藻Synechocystis sp. strain PCC 6803中确认出编码甲基转移酶的基因cpcM,而其编码的CpcM是能甲基化CpcB、ApcB和ApcF中Asn71/72位点N端的酶,这种甲基化过程能够稳定PBP并在PBS的高效能量稳定传递过程中起着重要作用。通过比较生物信息学和基因邻近分析,确认出来自鱼腥藻Anabaena sp. strain PCC7120的高度保守的开放阅读框all0012为其同源编码基因。实验通过分子生物学的方法克隆含有上下游同源臂的all0012基因片段并引入链霉素抗性基因,构建克隆载体pBlue-L-str/sp-R后转入整合载体得到pRL271-L-str/sp-R并最终转至大肠杆菌,再以三亲本杂交法转化鱼腥藻PCC7120,重组子由壮观霉素在BG11平板上筛选。在不同光照强度下对比培养鱼腥藻PCC7120突变型和野生型生长状况;在弱光照下突变型和野生型生长至对数生长期的倍增时间变化并不明显,而在强光下all0012缺失突变体比对应的野生型敏感,显示出强光光敏性,推测all0012基因可能是编码Asn甲基化酶的基因或参与该甲基化过程。另外,通过SDS-PAGE对在大肠杆菌中表达的重组系统进行了检测和验证。结果表明基因序列选取正确,all0012基因可以在相应的异源体内重组系统中表达,表达产物All0012蛋白分子量与预期相同且表达产物存在于该细胞上清中。

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
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