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静态的力学刺激对BK_(Ca)通道力学门控调节影响的初步研究

作　者: 王晓敏
导　师: 李国婧；赵虎成
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: BKCa通道力学刺激门控膜片钳
分类号: Q2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

大电导钙激活钾离子通道( large-conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)广泛地存在于动物的不同组织中,并参与调节细胞的多种功能。已经证实其非正常的表达和功能紊乱与心血管疾病发病有着密切的关系。本论文构建了BKCa通道α亚基的表达载体(pTargeT-BKCa-α),并将其转染到CHO细胞中,然后对转染的CHO细胞进行持续的力学刺激;另外,对鸡心肌细胞也进行了同样的力学刺激。通过对刺激后的CHO细胞的免疫学检测和心肌细胞的膜片钳检测并进行初步分析,得出以下结果:1.对转染了BKCa通道α亚基的CHO细胞施加12 hr(基底应变为12%)持续的力学刺激后,BKCa通道的表达量明显地增加。2.对鸡心肌细胞施加12 hr(基底应变为12%)持续的力学刺激后,BKCa通道的开放频率明显提高。以上结果表明,当细胞处于持续张力的不利环境中,其会通过上调BKCa通道的表达量和开放频率,从整体上提高对受到力学刺激的细胞降低张力的能力。此外,我们还构建了BKCa通道α亚基的几种突变体的表达载体,为进一步研究BKCa通道的力学门控调节机制提供了必要的实验材料。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
1 引言  8-12
  1.1 BK_(Ca) 通道结构  9-10
  1.2 BK_(Ca) 通道的生物学功能  10-11
  1.3 BK_(Ca) 通道功能的调控  11-12
  1.4 研究目的和意义  12
2 材料与方法  12-23
  2.1 实验材料  12
    2.1.1 动物材料  12
    2.1.2 菌株  12
    2.1.3 试剂  12
  2.2 实验方法  12-23
    2.2.1 鸡心肌细胞分离和培养  12-13
    2.2.2 膜片钳检测力学刺激后的鸡心肌细胞  13-14
    2.2.3 构建BK_(Ca) 通道的α亚基表达载体  14-20
    2.2.4 CHO 细胞复苏、传代与冻存  20-21
    2.2.5 PEG 法大量提取质粒  21-22
    2.2.6 CHO 细胞转染  22
    2.2.7 免疫学检测力学刺激后的转染pTargeT-BK_(Ca)-α的CHO 细胞  22-23
3 结果与分析  23-31
  3.1 BK_(Ca) 通道的鉴定与刺激前后其开放频率的变化  23-26
    3.1.1 电导的计算  23-24
    3.1.2 电压依赖性、钙离子依赖性的分析  24-26
    3.1.3 力学依赖性的分析  26
  3.2 BK_(Ca) 通道的α亚基表达载体的构建  26-30
  3.3 力学刺激表达有BK_(Ca) 通道的CHO 细胞后的免疫学检测  30-31
4 讨论与结论  31-33
  4.1 BK_(Ca) 通道的鉴定  31-32
  4.2 肌细胞BK_(Ca) 通道力学依赖性与细胞的自我保护作用  32-33
  4.3 结论  33
5 BK_(Ca) 通道力学门控调节机制研究的展望  33-36
致谢  36-37
参考文献  37-42
附录  42-43
作者简介  43

静态的力学刺激对BK_(Ca)通道力学门控调节影响的初步研究

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