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高原环境下大鼠肠道紧密连接蛋白occludin表达及其干预的实验研究

作　者: 段云
导　师: 张方信
学　校: 兰州大学
专　业: 内科学
关键词: 高原缺氧 occludin蛋白益生元肠粘膜屏障
分类号: R594.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景高原地区(海拔3000m以上),自然环境恶劣,主要环境特点为低氧、高寒、强辐射和日温差大。当普通人群从低海拔地区进入这个区域,随着氧分压的降低,形成氧分压差,机体出现低氧反应,呼吸系统最先做出适应性调整,呼吸频率增快,随后心搏率和心输出量相应增加,以增加动脉血流量改善血液输氧的能力,用来改善机体缺氧。但是,即使机体做出相应的调整,也难以在高原环境下达到低海拔环境机体的生理机能,而引发各系统：呼吸、循环、神经、骨骼和消化等多系统反应。目前,国内外文献对高原缺氧的研究普遍集中于神经,呼吸,循环系统,而对消化系统方面的高原文献研究相对比较稀少。随着我国青藏铁路的通车,低海拔地区人群前往高原地区的人群数量必然增加,出现消化道疾病的人数也会相应上升。过去把上高原人群中出现腹泻,厌食等症状简单的归结为“水土不服”,实则与肠道粘膜屏障功能障碍有着密切的关系。近年的研究证实,肠道不仅有消化和吸收的功能,还有着内分泌、免疫、屏障支持等功能。而肠道粘膜屏障对机体的重要性正在被越来越多的学者所认识,occludin作为肠道紧密连接的重要结构蛋白是当今研究的热点。人体肠道中生活着远远超过自身细胞数量的微生物,一旦肠道黏膜屏障出现受损,紧密连接间缝隙增大,有助于细菌等有害物质的移位,势必会造成肠源性内毒血症,进而加重肠道黏膜屏障受损,形成恶性循环,严重可引起多器官功能障碍综合症,全身炎症反应综合症,危及生命。因此本文在高原天然环境下造成大鼠高原缺氧模型并给予微生态制剂进行干预对occludin蛋白实验研究。目的在高原环境下建立大鼠缺氧模型,并给予实验组微生态制剂益生元(低聚半乳糖),采用免疫组化法检测occludin蛋白表达,采用Real time RT-PCR法实时定量occludin mRNA表达,并作occludin蛋白与occludin mRNA之间相关性的分析。探讨高原缺氧环境下肠粘膜屏障的损伤与occludin蛋白表达量之间的关系；微生态制剂对肠黏膜屏障损伤的治疗作用。方法在3848米建立高原缺氧模型大鼠共48只,随机选24只为高原缺氧对照组,另24只为高原缺氧+益生元组,再按2d、4d和6d时间点,细分为6个亚组,每组8只。高原缺氧+益生元组给予微生态制剂低聚半乳糖,在2,4,6d通过腹腔注射水合氯醛的方式麻醉下收集大鼠回肠标本,把获得的标本一部分放入固定液中,应用免疫组织化学法检测肠粘膜紧密连接occludin蛋白表达,另一部分放入冻存管再移入液氮罐中保存,实时荧光定量PCR法检测occludin mRNA含量。分别对时间点高原缺氧对照组与高原缺氧+益生元组的occludin蛋白表达量和occludin mRNA含量相应的实验数据作两两比较,观测连续各时间点occludin蛋白表达量和occludin mRNA含量的数据指标。进一步评判微生态制剂对高原缺氧下损伤肠粘膜屏障的治疗价值。结果(1)采用越野车急进高原的方式,在海拔3848米成功建立了高原缺氧大鼠模型；(2)明确了对照组肠粘膜紧密连接occludin蛋白表达2d>4d>6d亚组,而实验组occludin蛋白表达2d<4d<6d亚组；动态观察,occludin蛋白表达实验组要比同期对照组高(P<0.05)；(3)用Real time RT-PCR定量occludin mRNA结果与occludin蛋白表达结果相一致,两者之间呈显著正相关(R=0.9553,P<0.01),提示益生元可能通过增加肠粘膜TJ occludin mRNA来增加TJ occludin蛋白含量,改善高原缺氧所致肠粘膜屏障障碍。结论本课题通过建立高原缺氧模型证实了高原缺氧对肠粘膜屏障有损害作用,微生态制剂对改善由高原缺氧对肠粘膜屏障功能损害有一定的应用价值。为高原胃肠病的进一步研究提供了新的思路及治疗方法。

全文目录

中英文缩略语表  6-8
中文摘要  8-11
Abstract  11-14
前言  14-17
材料和方法  17-22
实验结果  22-29
讨论  29-32
参考文献  32-37
附:综述  37-44
  参考文献  42-44
攻读学位期间发表的学术论文  44-45
致谢  45

高原环境下大鼠肠道紧密连接蛋白occludin表达及其干预的实验研究

内容摘要

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