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压力作用对山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞自组装组织块中整合素α5β1表达的影响

作　者: 刘运冬
导　师: 康宏
学　校: 兰州大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 一月龄山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞压缩力机械力学信号转导组织工程整合素α5β1
分类号: R782.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：研究整合素α5β1在自然山羊颞下颌关节盘组织(temporomandibular joint disc, TMJ disc)中及在山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞体外培养中的表达和压力作用对整合素α5β1在体外自组装山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞组织工程块中的表达的影响。方法：1.切取健康一月龄山羊颞下颌关节盘及颞下颌关节髁突关节软骨,4%多聚甲醛固定24h,SP法免疫组织化学法检测整合素α5β1在自然山羊颞下颌关节盘组织中的表达和分布。体外无菌环境下,切取一月龄双侧山羊颞下颌关节盘,剪碎,用0.1%Ⅰ型胶原酶消化过夜,收集关节盘纤维软骨细胞,原代培养及传代培养,P3代细胞爬片,SP法免疫细胞化学法检测整合素α5β1在山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞中的表达和分布情况。2.收集P3代体外培养的山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞,以2×106个/孔于直径5 mm×高10 mm琼脂孔内构建体外山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞自组装组织工程块,培养2w,然后采用自制的压力加载系统,随机分成三组：动态压力组、静态压力组和正常培养对照组。处理1w后取三组自组装组织工程块做直径、厚度、重量观测；天狼猩红胶原染色观察；整合素α5β1 SP法免疫组织化学染色,采用ImagePro Plus 6.0(Media Cybernetics, Sliver Spring, MD, US)图像分析系统,以切片的光密度值做定量分析。结果：1.整合素α5β1在健康一月龄自然山羊颞下颌关节盘组织中呈阳性着色,其中成纤维样细胞和软骨细胞样细胞均有表达。P3代山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞爬片显示整合素α5β1主要表达于胞膜和胞浆中。2.三组山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞自组装组织工程块的大小、重量无统计学差异。胶原天狼猩红染色显示,动态压力组较静态压力组和正常培养对照组染色更明显。整合素α5β1在自组装块中不均匀表达,其中动态压力组较静态压力组和正常培养对照组染色更明显、更均匀,光密度分析其差异有统计学意义,而静态压力组光密度值较正常培养对照组低,但无统计学差异。结论：1.整合素α5β1在健康一月龄自然山羊颞下颌关节盘组织的成纤维样细胞和软骨细胞样细胞中均有表达,在P3代山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞中,整合素α5β1主要表达于细胞胞膜和胞浆中。2.整合素α5β1在山羊TMJ关节盘纤维软骨细胞自组装组织工程块中,动态压力可以上调其表达,而静态压力对其影响不大,整合素α5β1可能在山羊TMJ关节盘纤维软骨细胞自组装组织工程块中介导机械力学信号转导作用。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
文献回顾  9-16
  1 自组装工程化颗下领关节盘  9
  2 颗下领关节盘纤维软骨细胞对力学刺激的生物学反应  9-10
  3 整合素α5β1在介导力学信号转导机制中的作用  10-16
实验一整合素α5β1在自然山羊颞下颌关节盘组织及在其纤维软骨细胞体外培养中的表达  16-24
  1.1 实验材料  16-18
  1.2 实验方法  18-21
  1.3 实验结果  21-22
  1.4 讨论  22-23
  1.5 结论  23-24
实验二压力对山羊颞下颌关节关节盘纤维软骨细胞自组装组织工程块中整合素α5β1表达的影响  24-31
  2.1 实验材料  25
  2.2 实验方法  25-27
  2.3 实验结果  27-29
  2.4 讨论  29-30
  2.5 结论  30-31
参考文献  31-37
缩略词表  37-39
在学期间的研究成果  39-40
致谢  40

压力作用对山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞自组装组织块中整合素α5β1表达的影响

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