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丝素蛋白支架构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的实验研究

作　者: 高秀品
导　师: 葛自力
学　校: 苏州大学
专　业: 烧伤整形外科学
关键词: 丝素蛋白口腔黏膜固有层修复组织工程
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨应用丝素蛋白支架材料构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的可行性。方法:1、采用匀浆法分离成单细胞悬液再贴壁培养的方法培养大鼠口腔黏膜成纤维细胞,传代至第3代细胞时行波形蛋白鉴定,荧光染料染色后接种到孔径为265μm的多孔丝素蛋白支架材料上,24小时检测细胞粘附率;分别对培养1、4、7天行激光扫描共聚焦显微镜观察细胞粘附增殖情况;4、7天行细胞支架复合物行扫描电镜观察。2、雄性SD清洁级大鼠48只,随机分为3组。A组:实验组即口腔黏膜固有层组,n=16,以丝素蛋白支架构建的口腔黏膜固有层修复大鼠口腔颊黏膜圆形缺损(直径10㎜);B组:阴性对照组即丝素蛋白支架组,n=16,以丝素蛋白支架组修复大鼠口腔颊粘膜圆形缺损(直径10㎜);C组:空白对照组,n=16,以凡士林油纱覆盖大鼠口腔颊粘膜圆形缺损(直径lO mm)。术后7、14、21及28天分别行大体观察、创面直径测量、组织学、免疫组织化学检测。结果:1、大鼠口腔黏膜成纤维细胞培养:①光镜下观察细胞形态大多数完整、分散度好及细胞增殖快,波形蛋白检测三代细胞时阳性率为99﹪。细胞材料复合培养24小时后细胞粘附率为(97.76±1.34)﹪。②激光共聚焦显微镜观察第1天细胞呈圆形或椭圆形沿着支架及孔的边缘呈现散在的、单一的分布;第4天支架上细胞数量显著增多,细胞融合、粘附。第7天支架及孔径内部细胞呈团簇状、片状生长,呈现长梭形、椭圆形细胞覆盖了材料的大部分。③扫描电镜观察第1、4天大鼠口腔黏膜成纤维细胞呈梭形或多角形在材料上粘附伸展;第7天细胞表面有细小绒毛和褶皱形成,与接触部位伸伪足形成,呈(鸭蹼)状粘附和包绕纤维并可见细胞分泌的基质沉积于细胞周围和表面,细胞数量增多,细胞在支架材料上生长旺盛。2、创面观察:①创面大体观察:术后3组创面直径收缩率为C组﹥B组﹥A组,其中A组及B组创面呈现逐渐收缩,C组呈现先慢后快的收缩。术后7天A组及B组创面均被黄色薄膜覆盖,C组创面被浅黄色伪黏膜覆盖。②组织学显示:HE染色示术后C组在各个时间点创面炎性细胞密度及数量均大于A组及B组。③免疫组化显示:术后7天三组新生黏膜广谱角蛋白(cytokeration ,CK)表达均阳性。A组可见上皮层数明显多于B、C两组, C组最少,钉突粗大。A、B组新生上皮与正常口腔黏膜相似,上皮化程度方面A组明显优于B组;C组口腔黏膜上皮厚薄不一,上皮下炎性细胞多。CD31染色显示:术后A组在各个时间点新生毛细血管数量最多,且分布均匀。结论:1、大鼠口腔黏膜成纤维细胞可以在孔径为265μm的丝素蛋白支架材料粘附、生长、增殖,成功构建大鼠口腔黏膜固有层,为修复大鼠口腔颊黏膜缺损创造了条件。2、丝素蛋白支架材料构建的大鼠口腔黏膜固有层能促进口腔黏膜上皮生长,加速创面愈合,抑制口腔黏膜创面的收缩,减轻疤痕挛缩。3、应用丝素蛋白支架材料构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损是可行的,有一定临床应用价值。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
前言  10-14
  参考文献  11-14
第一部分组织工程化大鼠口腔黏膜固有层的构建  14-28
  材料与方法  14-19
  结果  19-21
  讨论  21-24
  结论  24-25
  参考文献  25-28
第二部分组织工程化大鼠口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的实验  28-46
  材料与方法  28-32
  结果  32-37
  讨论  37-41
  结论  41-42
  参考文献  42-46
综述  46-55
  参考文献  51-55
附图  55-65
中英文对照缩略词表  65-66
攻读硕士学位期间发表的论文  66-67
致谢  67-69

丝素蛋白支架构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的实验研究

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