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人喉癌细胞异质性研究及喉癌干细胞标志的初选

作　者: 靳阳子
导　师: 皇甫辉
学　校: 山西医科大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 喉癌实体瘤异质性肿瘤干细胞表面标记物
分类号: R739.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:1.通过原代培养人喉癌实体瘤细胞,克隆分离异质性细胞亚群,筛选出肿瘤干细胞样细胞亚群。2.比较喉癌肿瘤干细胞样亚群与不同细胞亚群细胞表面标记物表达的差异,初步筛选人喉癌实体瘤干细胞的细胞表面标记物。方法:1.原代培养人喉癌实体瘤细胞,组织标本取材于山西医科大学第一附属医院耳鼻喉科15例诊断为喉鳞状细胞癌患者的新鲜实体瘤手术标本。2.应用有限稀释法对体外培养的喉癌细胞进行单细胞克隆培养,分离异质性亚群,选取其中形态差别最大的两个克隆集落命名为1型和2型细胞亚群,分别进行下述实验。I型和2型亚群细胞继续进行单细胞亚克隆培养。比较其在形态及分化能力方面的差异。3.MTT(甲基噻唑基四唑)法检测1型和2型亚群细胞的增殖活性;流式细胞仪检测两亚群细胞增殖周期;两型细胞分别裸鼠移植检测其成瘤能力。4.应用免疫荧光细胞化学技术定性的观察1型和2型亚群细胞表面标记物的表达情况;流式细胞技术定量的检测两型亚群细胞表面标记物CD133、CD44的表达。5.所有数据采用均数±标准差表示,SPS统计软件包进行t检验,以P<0.05作为差异显著性标准。结果:1.喉癌实体瘤细胞分离得到1型和2型细胞形态差异最大的两个亚群。1型细胞成长梭形,突起少,亚克隆培养未产生子代细胞;2型细胞成多角形,多突起,继续培养产生的子代克隆出现异质性细胞。2.MTT法检测两型细胞的增值能力,2型亚群细胞在接种5天后显示出比1型细胞更强的增值活性。3.流式细胞仪测定DNA相对含量,确定细胞各时相所占的百分率。大部分2型细胞处在G0/G1期,显著高于1型细胞,经t检验由显著差异(P<0.05)。4.1型肿瘤细胞种植6周后裸鼠皮下未见瘤体形成(0/5);2型肿瘤细胞裸鼠皮下种植2周后形成瘤体,成瘤率为100%(5/5)。2型亚群细胞亚克隆的子代多角形细胞种植到裸鼠皮下,成瘤率也达100%(5/5);而1型子代梭形细胞种植到裸鼠皮下未见成瘤。体外增值能力强,处于细胞周期G0/G1的比例明显高于1型细胞,是具有肿瘤干细胞特性的亚群。5.经细胞免疫荧光化学染色结果显示1型亚群细胞中CD44-FITC、CD133-FITC染色均为阴性;2型亚群细胞CD44-FITC染色强阳性,布满爬片,CD133-FITC染色恒量阳性,与2型细胞一定量的结合,均表达为细胞周缘绿色强荧光。6.流式细胞技术示CD44、CD133在1型亚群细胞不表达;2型亚群细胞中,95.1%±2.3%的细胞表达膜抗原CD44,23.8%±1.7%的细胞表达膜抗原CD133。与细胞免疫荧光化学技术的结果吻合。结论:1.原发性人喉癌实体瘤细胞具有异质性,存在着肿瘤干细胞样亚群。在本实验中,2型亚群细胞具有肿瘤干细胞生物学特性。2.膜抗原CD133、CD44可作为喉癌干细胞的表面标记物。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一章材料与方法  11-16
第二章结果  16-22
第三章讨论  22-25
第四章结论  25-26
参考文献  26-29
附录  29-30
综述  30-39
  参考文献  37-39
个人简介  39-40
致谢  40

人喉癌细胞异质性研究及喉癌干细胞标志的初选

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