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人胎肝细胞系L-02的功能检测和应用探讨

作　者: 胡昕鹏
导　师: 周平
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: L-02细胞 急性肝衰竭 肝细胞移植 生物人工肝
分类号: R657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 17次
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内容摘要


【目的】检测L-02胚胎肝细胞系所具有的肝细胞功能,用于急性肝衰竭大鼠以验证其治疗急性肝衰竭的作用,为肝细胞移植和生物人工肝(BIOARTIFICIAL LIVER, BAL)寻找一种新的可用的肝细胞材料。【方法】1.取对数生长期且增殖良好的L-02细胞系分别提取其RNA及蛋白,采用RT-PCR及WESTERN-BLOTTING从基因及蛋白水平检测L-02细胞系白蛋白及多种肝细胞特异性酶的表达。采用免疫荧光方法标记白蛋白和葡糖醛酸基转移酶,激光共聚焦显微镜下直接观察表达情况。2.取生长良好的L-02细胞,调整细胞计数至5*10~7/ML,将1ML细胞悬液经脾脏植入大鼠体内(N=10, G1),并于移植后24小时行大鼠90%肝切除诱导急性肝衰竭,观察L-02细胞对急性肝衰竭大鼠所起的保护作用。以未输注细胞的急性肝衰竭大鼠做为对照(N=15, G2)。模型建立后每隔24小时取血一次,分别测定血氨及肝功能指标变化情况,并统计存活率。3.取2*10~6个L-02细胞植入裸鼠肩部,同时取等量HEPG-2细胞植入同一只裸鼠对侧肩部,对比观察成瘤情况。【结果】1. RT-PCR可检测到L-02细胞表达白蛋白(ALB)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-Π)、人凝血因子X(HBCF-X)。WESTERN-BLOTTING检测可见白蛋白条带,且白蛋白的表达量与人原代肝细胞相似。免疫荧光标记、激光共聚焦显微镜下观察到白蛋白和葡糖醛酸基转移酶(UGT)的表达。2.与对照组的急性肝衰竭大鼠相比,输注L-02细胞的急性肝衰竭大鼠存活时间明显延长,输注细胞的大鼠术后一周的存活率超过70%,而对照组大鼠在72小时内全部死亡。实验组大鼠血氨和肝功能得到明显改善,肝切除后24小时内指标升高,且多于48小时后呈下降趋势。对照组大鼠则呈持续上升趋势,且24小时上升幅度高于实验组。3.两组裸鼠成瘤情况:HEPG-2细胞注射两周后可观察到裸鼠成瘤,L-02细胞无成瘤情况。【结论】通过上述实验表明L-02细胞具有人正常肝细胞的某些合成及分泌功能,能表达白蛋白及多种肝细胞特异性酶,即L-02细胞并未脱离肝细胞的本质。通过动物体内实验进一步证实了L-02具有延长急性肝衰竭大鼠存活时间,改善肝功能的作用,且无成瘤危险。总之,具备人肝细胞功能而又无成瘤危险的的L-02细胞系,有望为肝细胞移植及BAL提供较好的细胞来源。

全文目录


全文缩略词对照表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-9
前言  9-10
材料与方法  10-22
实验结果  22-28
讨论  28-30
参考文献  30-31
文献综述  31-46
  参考文献  39-46
附录  46-47
致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 外科学各论 > 腹部外科学 > 肝及肝管
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