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吴茱萸碱对人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞侵袭的影响

作　者: 李晓玲
导　师: 张英怀
学　校: 河北医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 吴茱萸碱腺样囊性癌涎腺侵袭 transwell小室
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC),是最常见的涎腺恶性肿瘤之一,该肿瘤具有侵袭性强、浸润性生长,早期沿神经血管束向远处扩展和转移等特征。目前临床对于涎腺腺样囊性癌的治疗仍以手术切除为主,但手术治疗难以彻底切除,术后复发率较高,远期疗效较差,对放疗不敏感,传统的化疗药物效果不显著,因此,探索新的治疗方法成为学者们关注的焦点,利用从植物中提取的有效成分影响肿瘤细胞的侵袭成为目前研究的热点之一。中药吴茱萸为芸香科植物吴茱萸干燥近成熟果实,吴茱萸碱(evodiamine)为其主要活性物质。近来的研究表明,吴茱萸碱可抑制肿瘤细胞的转移与浸润。本研究拟采用不同浓度的吴茱萸碱处理人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞后,观察不同时间点的ACC-M细胞对Transwell小室侵袭的情况。为临床应用中药制剂预防并治疗人涎腺腺样囊性癌的转移与侵袭提供实验依据。方法:1材料(1)细胞系:高转移ACC-M人涎腺腺样囊性癌细胞系,购自上海交通大学医学院口腔外科实验室,由上海交通大学医学院口腔颌面外科1995年建立。(2)吴茱萸碱:对照品,中国药品生物制品检定所提供。(3)Matrigel(4)Transwell小室(跨膜细胞培养器,膜的孔径为8μm)等。2方法(1)药液配制:吴茱萸碱用二甲基亚砜溶解配制成20mg/ml储存液,使用前用培养液稀释。(二甲基亚砜的终浓度小于0.1%,此浓度对细胞无影响)。(2)细胞培养:采用RPMI1640培养基加入10%胎牛血清和青霉素(100U/ml)、链霉素(100μg/ml),于37℃、5%CO2恒温箱内饱和湿度下培养,24～48小时传1代,以0.04%二乙胺四乙酸二钠(EDTA)和0.25%胰蛋白酶(1:1)混合液消化传代。(3)transwell小室下室内加入含有肝细胞生长因子(HGF)(化学趋化物)的10%的细胞培养液200ul(30ng/200μl),上室膜的底面预先铺好Matrigel 50μl;(4)在每个transwell小室的上室中加入含有2×105个ACC-M细胞的分别用0μg/m(l空白对照), 0.01μg/ml, 0.1μg/ml, 1μg/ml, 10μg/ml, 100μg/ml的吴茱萸碱处理(37℃,20min)的ACC-M细胞悬液(细胞为处于生长对数期的细胞)200μl,37℃,5%CO2条件下孵育。每组3个复孔。孵育2h、4h、6h、8h、10h后,用棉签擦去微孔膜上室面的细胞,10%中性福尔马林固定30分钟,瑞姬染色;(5)将整个膜以“井”字划为9格,400×镜下观察,在中心格随机选一个视野,膜周边格随机选四个格,各选一个视野,计数5个视野穿过微孔膜的细胞总数。侵袭抑制率公式如下:(对照小室穿膜细胞数均值-处理小室穿膜细胞数均值)/对照小室穿膜细胞数均值×100%;(6)统计处理:采用重复测量的方差分析。结果:吴茱萸碱处理组(实验组)较对照组穿过上室底面膜的细胞数少,细胞数随浓度增大,时间增长基本呈递减趋势,侵袭抑制率随浓度的增大而增大,随时间的增长而增大,其中10小时,100μg/ml时,侵袭抑制率可达59.99%。经统计学分析,不同浓度之间存在差别,(F=7.245,P<0.05),不同时间之间不存在差别(F=7.050,P >0.05),时间与浓度之间不存在交互作用(F=1.426,P >0.05)。结论:1.吴茱萸碱能明显抑制人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的侵袭,与对照组相比具有显著性差异。2.吴茱萸碱抑制人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的侵袭与药物浓度之间具有依赖性,随药物浓度增加,抑制率增高。抑制率和药物作用时间之间没有依赖性。药物浓度和作用时间对侵袭抑制率的影响无交互作用。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
研究论文吴茱萸碱对人涎腺腺样囊性癌细胞系 ACC-M 侵袭的影响  9-30
  前言  9-10
  材料与方法  10-15
  结果  15-17
  附图  17-22
  附表  22-23
  讨论  23-25
  结论  25-26
  参考文献  26-30
综述吴茱萸碱抑制肿瘤作用的研究进展  30-41
致谢  41-42
个人简历  42

吴茱萸碱对人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞侵袭的影响

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