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鱼藤素抗血管生成作用评价及延缓胚胎发育机制研究

作　者: 张修彦
导　师: 吴新荣
学　校: 华南理工大学
专　业: 制糖工程
关键词: 鱼藤素斑马鱼抗血管生成胚胎发育延缓原位杂交
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

鱼藤素(Deguelin)是除鱼藤酮之外植物中最常见的鱼藤酮类化合物,它具有昆虫毒杀和生长发育抑制活性,近年来又发现其具有强抗肿瘤活性。据报道,鱼藤素对皮肤癌、乳腺癌、结肠癌和肺癌具有化学预防作用。到目前为止鱼藤素在生物体内的抗肿瘤机制及其对生物个体发育程序的影响还没有得到确切的解释。本文的研究集中在鱼藤素抗血管生成作用,以及探讨其延缓胚胎发育的机制。具体研究内容如下:第二章的研究表明,经0.5μmM鱼藤素在斑马鱼12hpf的时候加药,可以使斑马鱼胚胎ISV(节间血管)缺失。0.1mM、0.2mM、0.4mM的鱼藤素处理鸡胚后载体5mm内的血管数目分别为4.50±0.79、2.30±0.67、0.75±0.71与1%DMSO对照组相比(14.54±0.93)数目显著降低。通过T-test检验算出P<0.01,结果具有非常显著性差异。综合两个体内实验结果,证明鱼藤素具有抗血管生成作用。第三章的研究表明,0.15μM、0.8μM的鱼藤素处理组斑马鱼胚胎与1%DMSO对照组相比4.3hpf的时候开始缓慢。0.8μM的鱼藤素处理组胚胎停滞在4.3hpf不再发育。4.3hpf斑马鱼外包开始,因此鱼藤素影响的是斑马鱼胚胎外包。可能是因为鱼藤素影响斑马鱼胚胎细胞迁移第四章的研究表明,经0.4μM鱼藤素处理后,穿过小室的HUVEC细胞数(28.7±6.1)与对照组(121.0±4.6)相比显著降低,经T-test检验P<0.01,结果具有非常显著性差异。证明鱼藤素影响HUVEC细胞迁移。第五章的研究表明,通过原位杂交实验检测与斑马鱼胚胎外包相关的四种基因grk2,cyp11a1,jak1,pou5f1的表达时空和表达量,发现0.15μM鱼藤素处理组grk2 mRNA的表达量比对照组显著降低,其他三种没有变化。再通过荧光定量PCR定量检测grk2 mRNA的表达,发现经0.15μM鱼藤素处理组grk2 mRNA的表达是对照组的0.013倍。将制备的grk2 mRNA注入斑马鱼胚胎中,经0.15μM鱼藤素处理后发现胚胎发育延缓的表型没有改善。综上所述,本文通过斑马鱼模型和鸡胚模型证明了鱼藤素具有抗血管生成作用。利用Transwell小室证明鱼藤素可以影响HUVEC的迁移能力。通过原位杂交实验和荧光定量PCR试验发现经鱼藤素处理后grk2 mRNA的表达比对照组显著减少。

鱼藤素抗血管生成作用评价及延缓胚胎发育机制研究

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