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高糖环境下血管生成素2在肾小球内皮细胞中的表达及生物学作用

作　者: 张锦
导　师: 刘建社
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 高糖肾小球内皮细胞血管生成素类血管生成素受体血管内皮生长因子
分类号: R587.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:通过体外不同条件培养肾小球内皮细胞,观察血管生成素(angiopoietin, Ang)及其受体Tie2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF)表达变化规律,探讨Ang/Tie2、VEGF对肾小球内皮细胞功能的影响。方法:(1)体外培养小鼠肾小球内皮细胞,采用逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)方法观察正常糖对照组(D-glucose 5.6mmol/l ,NG)、高渗对照组(Mannitol 25mmol/l+D-glucose 5.6mmol/l, DM)、高糖刺激组(D-glucose 30mmol/l ,HG)不同时间点刺激小鼠肾小球内皮细胞后,Ang1、Ang2、Tie2、VEGF mRNA表达的变化。(2)脂质体分别转染针对Ang2基因的pcDNA3.1-Ang2质粒和Ang2siRNA,24h后RT-PCR法检测肾小球内皮细胞Ang2mRNA表达变化情况。(3)四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)法观察高糖刺激和转染pcDNA3.1-Ang2质粒24h后肾小球内皮细胞的增殖情况。(4)Transwell小室法观察高糖刺激肾小球内皮细胞24h后细胞迁移率变化情况。结果: (1)高糖刺激组Ang1mRNA在12h表达明显抑制,24h、72h、96h表达明显上调,差异有统计学意义,0h、48h较正常对照组表达无明显变化。高糖刺激组Ang2mRNA仅在24h、72h、96h表达明显上调,而在0h、12h、48h与正常对照组比较表达无明显变化。高糖刺激组Tie2mRNA在24h、72h、96h较正常对照组表达明显升高,在0h、12h、48h与正常对照组比较无统计学差异。(2)高糖刺激组VEGFmRNA在24h、72h、96h较正常对照组表达明显升高,在0h、12h、48h与正常组比较无统计学差异(。3)转染pcDNA3.1-Ang2质粒和Ang2siRNA 24h后,pcDNA3.1-Ang2质粒转染组较正常糖对照组Ang2mRNA明显升高,Ang2siRNA转染组较高糖刺激组Ang2mRNA明显抑制,差异有统计学意义。(4) pcDNA3.1-Ang2质粒转染组细胞增殖较正常对照组明显增快,差异有统计学意义。(5)高糖刺激组与正常糖对照组比较,高糖刺激组肾小球内皮细胞迁移率明显升高,与正常糖对照组比较差异有统计学意义。结论:(1)体外培养肾小球内皮细胞可稳定表达Ang1、Tie2、VEGF,高糖可诱导肾小球内皮细胞Ang2mRNA表达。高糖环境可引起肾小球内皮细胞Ang/Tie2、VEGFmRNA表达的改变,并呈时间依赖性。(2)Ang2可促进肾小球内皮细胞的增殖,高糖可促进肾小球内皮细胞的迁移。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-18
结果  18-20
附图  20-27
讨论  27-30
小结  30-31
参考文献  31-34
综述  34-58
  参考文献  46-58
致谢  58

高糖环境下血管生成素2在肾小球内皮细胞中的表达及生物学作用

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