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p58促胰岛β细胞凋亡机制的研究

作　者: 张洁
导　师: 孟雁；许海燕
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生物医学工程学
关键词: 2型糖尿病易感基因CDC2L2 p58 β细胞凋亡 2型糖尿病动物模型
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

2型糖尿病是一种具有明显遗传倾向的复杂的多基因疾病。CDC2L2是中国北方汉族人2型糖尿病的一个易感基因。目前,该基因与2型糖尿病发生发展的关系尚不清楚。本论文,我们针对CDC2L2编码的蛋白p58与胰岛β细胞凋亡的关系及其作用的分子机制进行了研究。研究结果相显示:在正常糖浓度和高糖浓度下,p58蛋白的高表达均可诱导胰岛β细胞(INS-1细胞)凋亡。Western Blot检测发现,在正常糖浓度培养时,凋亡的INS-1细胞中Caspase-3表达上调,但胞浆内CytoC、Bcl-2和Bax的表达与对照组无显著性差异;在高糖培养时,凋亡的INS-1细胞中Caspase-3、胞浆内CytoC和Bax的表达水平较对照组明显上升、Bcl-2的表达水平显著下降。上述结果表明,正常糖浓度和高糖浓度培养条件下p58诱导INS-1细胞凋亡的分子机制有所不同。p58在高糖条件下诱导INS-1细胞凋亡的分子机制可能是通过上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,从而增加线粒体外膜的通透性,使CytoC由线粒体向胞浆释放,最终活化Caspase-3引起细胞凋亡。p58在正常糖浓度时诱导INS-1细胞凋亡可能对2型糖尿病的早发具有重要作用,但其机制尚有待进一步研究。为了在动物水平上验证上述实验结果,我们利用高脂饮食喂饲和单次小剂量STZ注射的方法建立了2型糖尿病大鼠模型。对大鼠模型体重、空腹血糖、血清胰岛素的检测及对其胰腺组织的病理学和胰岛β细胞凋亡的分析显示:2型糖尿病大鼠在注射STZ后,随着空腹血糖的显著升高和血清胰岛素水平的显著降低、体重明显下降;在疾病的早期,大鼠模型的胰岛β细胞凋亡明显,但胰腺组织内胰岛β细胞的变性较轻,随着疾病的发展,胰岛β细胞变性逐渐加剧。上述实验结果为在动物水平上进一步验证p58与胰岛β细胞凋亡的关系及其分子作用机制奠定了重要基础。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
总论  7-9
第一部分 2型糖尿病易感基因CDC2L2编码蛋白p58与胰岛β细胞凋亡机制的研究  9-52
  前言  9-11
  材料与方法  11-32
    1. 实验材料  11-18
    2. 实验方法  18-32
      2.1 载体pcDNA3.0-EGFP-p58的构建  18-23
      2.2 真核细胞培养  23-24
      2.3 脂质体介导的真核细胞转染  24
      2.4 ANNEXIN V-FITC染色及流式细胞仪检测细胞凋亡  24-25
      2.5 Western Blot  25-30
      2.6 细胞色素C活性的检测  30-31
      2.7 统计分析  31-32
  实验结果  32-49
    1. 载体pcDNA3.0-EGFP-p58的构建  32-34
    2. p58对胰岛β细胞凋亡的影响  34-41
    3. 凋亡相关蛋白的检测  41-49
      3.1 INS-1细胞凋亡过程中Caspase-3表达水平的变化  41-43
      3.2 INS-1细胞凋亡过程中Bcl-2家族成员表达水平的变化  43-47
      3.3 INS-1细胞凋亡过程中胞浆内细胞色素C水平的变化  47-49
  讨论  49-52
第二部分 2型糖尿病疾病动物模型的建立及其胰腺组织的病理学分析  52-69
  前言  52-54
  材料与方法  54-57
    1. 实验材料  54
    2. 实验方法  54-57
  实验结果  57-67
    1. 2型糖尿病大鼠体重的变化  57
    2. 2型糖尿病大鼠空腹血糖的测定  57-58
    3. 2型糖尿病大鼠血清胰岛素的测定  58-60
    4. 2型糖尿病大鼠胰腺组织的病理学分析及TUNEL染色结果  60-67
  讨论  67-69
小结  69-70
参考文献  70-73
缩略词表  73-74
综述  74-82
  参考文献  78-82
致谢  82

p58促胰岛β细胞凋亡机制的研究

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