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趋化因子CCL2/CCR2在人早孕期绒毛和滋养细胞的功能性表达

作　者: 马方
导　师: 李大金；杜美蓉
学　校: 复旦大学
专　业: 妇产科学
关键词: 母胎界面 趋化因子 CCL2 CCR2 滋养细胞
分类号: R714
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


趋化因子是一组小分子量(8-10KD)蛋白质,由70-90个氨基酸组成,结构和功能上具有一定的相关性,均通过与细胞膜表面相应的G蛋白偶联受体结合并发挥各种生物学作用。早孕母-胎界面含有丰富的趋化因子及其受体,存在着复杂交织的调控网络,趋化因子及其受体构成了滋养细胞与蜕膜细胞的相互联系,在母-胎免疫耐受中发挥调节作用。作为最早被鉴定的CC类趋化因子之一,CCL2和受体CCR2结合后,参与炎症、动脉粥样硬化、肿瘤等相关疾病的发生与发展；但关于CCL2在早孕母-胎界面的表达和在母-胎免疫调节中的作用有待研究完善。我们课题组前期研究发现,人早孕蜕膜组织和蜕膜基质细胞均高水平转录和翻译CCL2和CCR2; CCL2/CCR2可能参与蜕膜基质细胞与蜕膜免疫活性细胞间相互对话和交流,并维持母-胎界面Th2型免疫偏移。本课题将进一步完善前期工作,拟研究CCL2/CCR2在人早孕绒毛组织和滋养细胞中的表达和分泌,以解析其在母-胎界面的生物学调节作用。1.趋化因子CCL2/CCR2在早孕绒毛组织的表达本研究首先从转录和翻译水平探讨趋化因子CCL2及其相应配体CCR2在人早孕绒毛组织的表达。采用半定量RT-PCR和免疫组织化学法研究正常早孕人绒毛组织趋化因子CCL2及其相应配体CCR2的表达。结果显示：绒毛组织中等度转录和翻译趋化因子CCL2及其受体CCR2。2.趋化因子CCL2及其受体CCR2在早孕绒毛滋养细胞的功能表达采用免疫细胞化学的方法分析CCL2/CCR2在早孕绒毛滋养细胞和滋养细胞系Bewo细胞的定位表达。结果发现：滋养细胞和Bewo细胞中等度表达CCL2/CCR2。原代培养人滋养细胞48小时,收集培养上清检测CCL2的分泌水平。ELISA分析发现：滋养细胞能持续分泌CCL2,当种植密度为1×106cells/ml时,48小时累积分泌浓度为21.42±2.09ng／ml。应用外源性CCL2、CCR2受体拮抗剂RS102895、抗CCL2单克隆抗体及ERK/MAPK抑制剂U0126单独或共同处理滋养细胞；然后用3H-TdR掺入法分析其对滋养细胞增殖能力的影响。结果发现：外源性CCL2能促进滋养细胞的增殖,抗CCL2单克隆抗体能拮抗内源性CCL2对人滋养细胞的促增殖作用。CCR2受体拮抗剂RS 10289及ERK/MAPK抑制剂U0126能拮抗外源性CCL2对人滋养细胞的促增殖作用。综上所述,本研究分析了CCL2/CCR2在滋养细胞的表达；阐明了早孕滋养细胞通过自分泌CCL2促进自身增殖,可能有利于胎盘早期发育和结构稳定。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
第一部分 趋化因子CCL2/CCR2在人早孕绒毛组织的表达  11-19
  材料和方法  11-14
  结果  14-16
  讨论  16-19
第二部分 趋化因子CCL2及其受体CCR2在人早孕滋养细胞的功能表达  19-30
  材料和方法  19-23
  结果  23-28
  讨论  28-30
结论  30-31
参考文献  31-35
致谢  35-36
附录1 中英文缩略语  36-38
附录2 研究生期间发表和待发表的论文  38-39
综述 CCL2及其受体CCR2在母-胎界面中的作用  39-47
发表文章  47-51

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