学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

大鼠脑挫伤后脑组织NF-κB表达与损伤时间关系

作　者: 郭文平
导　师: 焦炎
学　校: 山西医科大学
专　业: 法医学
关键词: 临床法医学损伤时间推断 NF-κB 免疫印迹(Western blot)法实时荧光定量RT-PCR法
分类号: D919.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 39次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：应用免疫组化(SABC法)、免疫印迹(Western blot)法及实时荧光定量RT-PCR技术检测大鼠脑挫伤后脑组织中NF-κB的表达规律,探讨NF-κB表达与脑损伤经过时间的关系,以期为法医学实践中早期推断脑损伤时间提供科学的实验依据。方法：选取64只健康成年SD大鼠,雌雄不限,体重250±10g(由山西医科大学实验动物中心提供),随机分为实验组(n=56)及对照组(n=8),实验组依据损伤时间不同再分为7个亚组。对大鼠实施麻醉后,实验组采用自由落体打击法于颅骨中线旁3mm处造成脑挫伤模型,于损伤后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七个时间点(每个时间点8只)取挫伤处脑组织用常规苏木素-伊红染色技术(hematoxylin and eosin,HE);对大鼠脑挫伤后14d内继发性脑损伤的病理学改变、NF-κB的分布特征进行光镜观察,同时另取100mg,置于-80℃液氮中保存备用；对照组大鼠仅钻孔处理,但不受打击,其余处理与实验组相同。应用免疫组化(SABC)法、免疫印迹(Western blot)法及实时荧光定量RT-PCR技术结合图像分析技术半定量检测大鼠脑组织NF-κB含量的变化,并与对照组作比较。将所得数据进行统计学分析。结果：(1)紫外-可见光分光光度计检测RNA纯度、浓度及完整性较好,可以满足下一步实验的要求;(2) NF-κB分别与内参基因rpL32扩增效率一致,说明内参基因选择正确,引物设计特异性强、反应性能良好；(3)免疫组化(SABC)法、大鼠脑挫伤后在脑组织中于伤后1h即有少量NF-κB阳性细胞,48h阳性细胞明显增加并达到峰值,72h随后逐渐减少,7d后偶见阳性细胞,14d后未见阳性细胞。(4)免疫印迹(Western blot)法,大鼠脑挫伤后在脑组织中于伤后1h NF-κB蛋白增加,12-48达高峰,72h后下降,14d基本恢复到正常水平(5)实时荧光定量RT-PCR法,大鼠脑挫伤后在脑组织中于伤后1h NF-κBmRNA表达即快速增加,4h后逐渐下降,在到48h达低谷,而在72h增加并达高峰,7d和14d时表达弱。结论：大鼠脑挫伤后脑组织中NF-κB表达随着损伤时间呈规律性变化,可望用于法医学鉴定及早期法医学损伤时间推断。免疫组化技术操作简单且易行,免疫印迹(Western blot)法、实时荧光定量RT-PCR技术检测分子水平的变化敏感而且精确,均适合法医学研究及检案的需要。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
正文  8-30
  前言  8-9
  材料和方法  9-23
  讨论  23-26
  小结  26-27
  参考文献  27-30
附图  30-31
综述  31-38
  正文  31-35
  参考文献  35-38
个人简介  38-39
致谢  39

大鼠脑挫伤后脑组织NF-κB表达与损伤时间关系

内容摘要

全文目录

相似论文